唾液腺腺様嚢胞癌細胞におけるヘパラン硫酸プロテオグリカン代謝の分子病理学的特性

唾液腺腺样囊性癌细胞硫酸乙酰肝素蛋白多糖代谢的分子病理学特征

• 批准号: 11771111
• 负责人: 木村 信
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771111/
• 关键词: ヘパラン硫酸プロテオグリカン; 唾液腺腺様嚢胞癌; 細胞外基質; パールカン; RT-PCR; in-situハイブリダイゼーション; RNAプローブ

前年度は、ヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPG)のドメイン3を認識するDIG標識RNAプローブを作製し、in-situハイブリダイゼーション法により唾液腺腺様嚢胞癌由来培養細胞ACC3および腺様嚢胞癌組織におけるHSPGのmRNA発現パターンを検索した。今年度は、HSPGのヘパラン硫酸鎖結合部位であるドメイン1の発現および機能を検索するため、RT-PCRによりドメイン1のcDNAを合成した。1.ドメイン1の全長より10塩基対を両末端に多く含むプライマーを設計し、正常唾液腺cDNAおよびACC3細胞cDNAをもちいてPCRをおこなった。2.PCRの結果、正常唾液腺cDNAをもちいたものでは予想される塩基数(530bp)のバンドが得られた。この産物で2nd-PCRをおこなった後、新たに設計した、BamHIおよびHindIIIサイトを末端に含むプライマーでnested-PCRをおこなった。3.nested-PCRでは、予想されたサイズのバンドが得られたので、これを切り出し精製した。この精製物を、制限酵素切断により目的のcDNAであるかどうか確認した。制限酵素は、切断箇所が一カ所のみと推定されるPvuIIをもちいた。その結果、予想されるサイズの2本のバンド(282bpおよび235bp)が得られた。以上の結果から、正常唾液腺cDNAをもちいたHSPGドメイン1のcDNAの合成が確認された。このcDNAをもちいることにより、ドメイン1蛋白質の合成、ドメイン1認識プローブを作製する準備が完了した。現在、プローブを作製中で、今後、HSPG機能解析実験に有用な手段となることが期待される。

In the past year, the expression of HSPG mRNA in salivary gland carcinoma derived from cultured ACC3 cells and salivary gland carcinoma tissue was detected by DIG marker RNA expression and in-situ hybridization. This year, HSPG's cDNA binding site was synthesized by RT-PCR. 1. The full-length cDNA of the 10-mer pair contains a large number of cDNA fragments designed for normal salivary glands and ACC3 cell cDNA fragments. 2. PCR results, normal salivary gland cDNA cut off the middle of the cell, but not the base (530bp). The product is nd-PCR, new design, BamHI and HindIII. 3.Nested-PCR is a perfect way to get rid of all kinds of things. The purified product, the restriction enzyme, the target cDNA, the restriction enzyme, the restriction enzyme, the restriction enzyme The restriction enzyme is cut off from the putative PvuII. The result of this study was that the 2 original sites (282bp and 235bp) were found in the database. The above results confirm the synthesis of cDNA from HSPG and HSPG in normal salivary glands. The preparation of cDNA for protein synthesis and protein recognition is complete. Now, in the process of production, in the future, HSPG function analysis, useful means and expectations

项目成果

Kimura, S. et al.: "Perlecan (heparan sulfate proteoglycan) gene expression reflected in the characteristic histological architecture of salivary adenoid cystic carcinoma"Virchows Archiv. in press (2000)

Kimura, S. 等人：“Perlecan（硫酸乙酰肝素蛋白多糖）基因表达反映在唾液腺腺样囊性癌的特征性组织学结构中”Virchows Archiv。

Kimura, S. et al.: "Basement membrane heparan sulfate proteoglycan (perlecan) synthesized by ACC, adenoid cystic carcinoma cell of human salivary gland origin"Journal of Biochemistry. 25. 406-413 (1999)

Kimura, S.等人：“由ACC（人唾液腺来源的腺样囊性癌细胞）合成的基底膜硫酸乙酰肝素蛋白多糖（基底膜聚糖）”生物化学杂志。