歯周細菌Prevotellaheparinolyticaの免疫学的研究

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本年度はP.heparinolytica ATCC35895LPSとP.gingivalis ATCC33277(P.g)LPSのマイトゲン活性と細胞傷害活性およびアポトーシス誘導能を調べた。マイトゲン活性は、MTT法で、細胞障害活性は、LDHの測定により、アポトーシスは、Burton法によりDNAの断片化率を調べた。対照としてE.coli0111B4LPSを用いた。被験細胞は、Balb/cマウス腹腔マクロファージとした。Balb/cマウス腹腔マクロファージに各LPSを10μg、1μg、0.1μgの濃度で投与して、48時間後のマイトゲン活性を測定したところ、10μgE. coli LPSを加えたものを除いて、マイトゲン活性が上昇していた。LDH活性は、各LPS投与後4時間で計測したが、コントロールと比較して有意差が見られなかった。アポトーシスは、E.coli LPS10μg投与群にのみ、コントロールと比較して有意に高率に起こっていた。RT-PCRを行ったところ、E.Coli LPS10μgでは、Fasが発現していたが、Bcl-2も発現が見られた。Fasは、他の低い濃度のLPS刺激でも発現しており、それがE.Coli LPSに特徴的とは思えなった。アポトーシスに抑制的に働くサイトカインGM-CSFも、促進的に働くサイトカインTNF-αも、E.coli LPS10μg刺激時にも低い濃度での刺激時も変わらず発現していた。FasLは、すべてのLPS刺激において検出できなかった。GM-CSFレセプターは、すべての細胞群において、恒常的に発現していたが、P.g LPS,P.h LPS10μg投与群においては、mRNAの回収がうまくいかず十分な試験ができなかった。