メチシリン耐性表皮ブドウ球菌の溶血因子に関する研究

1.Hemolysinの精製強い溶血活性を示すMRSE strain 92-1の上清から効率的にhemolysinを分離するために,限外濾過膜(Mw cut off 10,000),セロチューブ(Mw cut off 8,000)を用いた透析をした.透析後,ポリエチレングリコール(#20,000)で濃縮して得られた粗hemolysin画分をゲル濾過(Sepharose CL-4B)カラムに供した結果,68管をピークとする1つのピークが得られ溶血活性はピーク直前に認められた.2.Hemolysin画分の熱および各種酵素に対する感受性熱に対する感受性試験では,40,50,60,70,80,90,100℃の各温水中にhemolysin画分を10分間作用させたのち,それぞれの溶血活性を測定した.その結果,すべての温度において溶血活性は認められ,hemolysinの失活は認められなかった.各種酵素に対する感受性試験では,タンパクおよびアミノ酸分解酵素としてtrypsin,chymotrypsin,protease,hyaluronidaseおよびlysozymeを,糖分解酵素としてβ-glucosidase,β-galactosidaseを用いた.37℃で1時間反応後,100℃で10分間作用させ各種酵素を失活させたのち,溶血活性を測定した,その結果,trypsin,chymotrypsinおよびproteaseで溶血活性(0%)が消失し,β-glucosidaseとβ-galactosidaseで溶血活性(13.9と2.7%)が低下した.このことから,活性本体の中心はタンパクであり,一部に糖を含んでいる可能性があることが考えられる.また,hemolysinが耐熱性であること,およびhemolysin画分を限外濾過膜(Mw cut off 10,000)を用いて濾過されたものには溶血活性が認められなかったことより,本hemolysinは低ペプチドでないことが示唆される.以上,MRSE strain 92-1のhemolysinは,糖タンパクであると考えられる.今後,精製hemolysinに対する抗体作製と部分精製およびwestern blottingをする予定である.

1.Hemolysinの精製強い溶血活性を示すMRSE strain 92-1の上清から効率的にhemolysinを分離するために,限外濾過膜(Mw cut off 10,000),セロチューブ(Mw cut off 8,000)を用いた透析をした.透析後,ポリエチレングリコール(#20,000)で濃縮して得られた粗hemolysin画分をゲル濾過(Sepharose CL-4B)カラムに供した結果,68管をピークとする1つのピークが得られ溶血活性はピーク直前に認められた.2.Hemolysin画分の熱および各種酵素に対する感受性熱に対する感受性試験では,40,50,60,70,80,90,100℃の各温水中にhemolysin画分を10分間作用させたのち,それぞれの溶血活性を測定した.その結果,すべての温度において溶血活性は認められ,hemolysinの失活は認められなかった.各種酵素に対する感受性試験では,タンパクおよびアミノ酸分解酵素としてtrypsin,chymotrypsin,protease,hyaluronidaseおよびlysozymeを,糖分解酵素としてβ-glucosidase,β-galactosidaseを用いた.37℃で1時間反応後,100℃で10分間作用させ各種酵素を失活させたのち,溶血活性を測定した,その結果,trypsin,chymotrypsinおよびproteaseで溶血活性(0%)が消失し,β-glucosidaseとβ-galactosidaseで溶血活性(13.9と2.7%)が低下した.このことから,活性本体の中心はタンパクであり,一部に糖を含んでいる可能性があることが考えられる.また,hemolysinが耐熱性であること,およびhemolysin画分を限外濾過膜(Mw cut off 10,000)を用いて濾過されたものには溶血活性が認められなかったことより,本hemolysinは低ペプチドでないことが示唆される.以上,MRSE strain 92-1のhemolysinは,糖タンパクであると考えられる.今後,精製hemolysinに対する抗体作製と部分精製およびwestern blottingをする予定である.