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歯周病原性菌の定着を促す唾液タンパク質遺伝子を導入した歯周病惹起動物モデルの作製

创建包含促进牙周病原菌定植的唾液蛋白基因的牙周病诱发动物模型

基本信息

批准号：
11771315
负责人：
片岡宏介
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

有力な歯周病原性細菌と考えられているPorphyromonas gingivalisは、グラム陽性菌との共凝集や唾液ペリクル構成成分との特異的結合により口腔表面に付着・定着する。我々は、これまでに、P.gingivalisの主たる付着因子である線毛は唾液ペリクル中の唾液タンパク質成分であるproline-rich protein1と特異的に結合すること、さらに、同タンパタ質のカルボキシル末端部分におけるペプチド(pPRP-C)領域において、強く結合することを報告した。本研究では、pPRP-C遺伝子(prp-c)を合成オリゴヌクレオチドから作製し、pPRP-Cを分泌するようにStreptococcus gordoniiを形質転換した。そして、このリコンビナントS.gordoniiの培養上清を用いて、in vitroでのP.gingivalis繊毛と唾液ペリクルとの結合阻害実験を行った結果、本結合を阻害した。また、この培養上清はP.gingivalisと数種の口腔レンサ球菌株との共凝集をも抑制することを明らかにしてきた。この結果を応用し、NIH3T3 fibroblast表面上にpPRP-Cを発現させる目的で、prp-cの5'-にPst Iサイト、3'-にSma Iサイトを付与しprp-cフラグメントを作製、哺乳類細胞発現ベクターに挿入しpPRP-C発現プラスミドを構築した。このプラスミドをfibroblastに導入し免疫組織染色法により発現の確認を行っているが、このシステムを用いることにより、これまで作製不可能であったP.gingivalisの定着・感染による歯周病惹起動物モデル作製の可能性が考えられる。

A study of pathogenic bacteria around the oral cavity shows that Porphyromonas gingivalis is a positive bacterium and co-agglutinates with saliva components, which bind specifically to oral surfaces. We report the presence of proline-rich protein1 and specific binding to the salivary protein component of P. genivalis in the terminal portion of the salivary protein (pPRP-C) domain. In this study, pPRP-C gene (prp-c) was synthesized and purified by Streptococcus gordonii. The results of the assay were as follows: (1) The culture supernatant of S.gordonii was used in vitro to inhibit the binding of P. gingivalis to S. gordonii. P. gingivalis and several species of oral cocci are inhibited from co-aggregation. These results were used to construct a system for pPRP-C discovery on NIH 3T3 fibroblast surfaces, prp-c 5'-Pst I server, 3'-Sma I server and mammalian cell discovery. While the confirmation of the findings was carried out by immunohistochemical staining of the fibroblasts and the system was used, it was impossible to make this procedure possible. The possibility of peridental disease causing animal seizures due to P. gingivalis infection has been examined.