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生物多様性を保つヒト唾液タンパク質由来能動・受動免疫型歯周病予防ワクチンの開発

开发基于主动/被动免疫的牙周病预防疫苗，该疫苗源自人类唾液蛋白，可保护生物多样性

基本信息

批准号：
23390481
负责人：
片岡宏介
金额：
$ 7.57万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011-04-01 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の当初の検討課題は、歯周病原菌と特異結合するヒト唾液タンパク質スタセリンおよびプロリンリッチプロテイン(PRP)上の最小結合部位アミノ酸配列を含むペプチドに対する、唾液IgA抗体による歯周病原菌の付着阻害効果をin vitroで検討することであった。1)まず、スタセリンおよびPRP上の最小結合部位アミノ酸配列を含むペプチド(Stat23およびPRP21)を作製・精製し、キャリアータンパク(KLH)に結合させ(多価)ペプチド複合体を作製すること。2)それらペプチド複合体を抗原とし、粘膜アジュバント(コレラトキシン(CT)、CpGオリゴDNA、Flt3L遺伝子配列をコードしたタンパク質発現DNAプラスミド)とともにマウスに経鼻投与し、唾液中に誘導される抗ペプチドIgA抗体を精製すること。3)その精製IgA抗体をインヒビターとして用い、それによる歯周病原菌の付着・定着阻害能を口腔内歯面モデルにて検討すること。であった。結果は、1)ペプチド合成をFmoc法により作製を試みたが、経済的、技術的な面で当初の作製予定量が確保できないと予想され、専門業者に外部注文した。2)2種の抗原および3種の粘膜アジュバントを組み合わせ、マウスに経鼻投与した。抗原特異的IgA応答を認めたものは、PRP21抗原のみであった。そのPRP21抗原に対する唾液IgA抗体の産生量について、最も効果の高い粘膜アジュバントは、CTであった。以後CTとPRP21を経鼻同時投与し、抗PRP21特異的唾液IgA抗体を精製し、約150匹のマウスから精製IgA抗体24.3mgが精製された。3)その精製IgA抗体溶液100μg/ml 100μLによるPRP被覆ハイドロキシアパタイトビーズへの歯周病原菌(P.gingivalis ATCC 33277)の付着阻害実験を行ったところ、最大97.7%の付着阻害が認められた。

The original research topic this year was to investigate in vitro the protective effects of salivary IgA antibodies on peridental pathogens by including a specific binding site on salivary salivary IgA receptors and praline receptors (PRP), which are the smallest binding sites. 1) Preparation, purification, binding (KLH) of the minimum binding site on the PRP, including acid alignment (Stat23 and PRP21). 2) Purification of anti-IgA antibodies induced by nasal administration and saliva in the presence of anti-IgA complex antigen, mucosal antigen (CT), CpG, DNA, Flt3L gene alignment. 3) Purified IgA antibodies can be used in the oral cavity to inhibit the development of peripheral pathogens.であった。The results are as follows: 1) The Fmoc method is used to determine the initial amount of production, technical analysis, and external analysis. 2)2 The three kinds of antigens were injected into the nasal cavity. Antigen-specific IgA antibodies are recognized by PRP21 antigen. The amount of IgA antibody produced in saliva against PRP21 antigen was significantly lower than that in normal saliva. After CT and PRP21 were administered simultaneously, anti-PRP 21 specific saliva IgA antibody was purified, about 150 samples of purified IgA antibody 24.3 mg were purified. 3) PRP-coated purified IgA antibody solution 100μg/ml 100μL was used to inhibit the growth of P. gingivalis ATCC 33277, the maximum inhibition rate was 97.7%.