生物多様性を保つヒト唾液タンパク質由来能動・受動免疫型歯周病予防ワクチンの開発

开发基于主动/被动免疫的牙周病预防疫苗，该疫苗源自人类唾液蛋白，可保护生物多样性

• 批准号: 23390481
• 负责人: 片岡 宏介
• 金额: $ 7.57万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011-04-01 至 2013-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23390481/
• 关键词: 歯周病; 予防ワクチン; 唾液タンパク質; 粘膜免疫; 分泌型IgA抗体; 定着阻害; 唾液

本年度の当初の検討課題は、歯周病原菌と特異結合するヒト唾液タンパク質スタセリンおよびプロリンリッチプロテイン(PRP)上の最小結合部位アミノ酸配列を含むペプチドに対する、唾液IgA抗体による歯周病原菌の付着阻害効果をin vitroで検討することであった。1)まず、スタセリンおよびPRP上の最小結合部位アミノ酸配列を含むペプチド(Stat23およびPRP21)を作製・精製し、キャリアータンパク(KLH)に結合させ(多価)ペプチド複合体を作製すること。2)それらペプチド複合体を抗原とし、粘膜アジュバント(コレラトキシン(CT)、CpGオリゴDNA、Flt3L遺伝子配列をコードしたタンパク質発現DNAプラスミド)とともにマウスに経鼻投与し、唾液中に誘導される抗ペプチドIgA抗体を精製すること。3)その精製IgA抗体をインヒビターとして用い、それによる歯周病原菌の付着・定着阻害能を口腔内歯面モデルにて検討すること。であった。結果は、1)ペプチド合成をFmoc法により作製を試みたが、経済的、技術的な面で当初の作製予定量が確保できないと予想され、専門業者に外部注文した。2)2種の抗原および3種の粘膜アジュバントを組み合わせ、マウスに経鼻投与した。抗原特異的IgA応答を認めたものは、PRP21抗原のみであった。そのPRP21抗原に対する唾液IgA抗体の産生量について、最も効果の高い粘膜アジュバントは、CTであった。以後CTとPRP21を経鼻同時投与し、抗PRP21特異的唾液IgA抗体を精製し、約150匹のマウスから精製IgA抗体24.3mgが精製された。3)その精製IgA抗体溶液100μg/ml 100μLによるPRP被覆ハイドロキシアパタイトビーズへの歯周病原菌(P.gingivalis ATCC 33277)の付着阻害実験を行ったところ、最大97.7%の付着阻害が認められた。

今年的最初挑战是在体外研究唾液IgA抗体抑制牙周病原体的附着在含有最小结合位点氨基酸序列对人唾液蛋白staserin和propine-Proline富含脯氨酸蛋白（PRP）上的牙周病原体（PRP）的影响，该蛋白（PRP）特异性地结合了牙周病原体。 1）首先，制备和纯化肽（STAT23和PRP21），这些肽包含staserin和prP上最小结合位点的氨基酸序列，并与载体蛋白（KLH）结合以创建（多价）肽络合物。 2）使用这些肽复合物作为抗原，将小鼠用粘膜佐剂（霍乱毒素（CT），CpG寡素和表达蛋白质表达的DNA质粒编码FLT3L基因序列）以净化抗肽IgA抗体IgA抗体IGA抗体。 3）使用纯化的IgA抗体作为抑制剂，并检查使用口服牙齿表面模型抑制牙周病原体粘附和定殖的能力。是。结果表明，1）尝试使用FMOC方法生产肽合成，但是预计在经济和技术方面的初始生产量将不可能，因此我们从专家订购了外部订单。 2）将两种抗原和三个粘膜佐剂组合在一起，并在鼻内给小鼠固定。唯一的抗原特异性IgA反应是PRP21抗原。对PRP21抗原生产唾液IgA抗体的最有效的粘膜佐剂是CT。之后，同时对CT和PRP21施用，以纯化抗PRP21特异性唾液IgA抗体，并从约150只小鼠中纯化24.3 mg纯化的IgA抗体。 3）在实验中，使用100μg/ml的纯化IgA抗体溶液抑制牙周病原体（牙龈疟原虫ATCC 33277）与PRP涂层羟基磷灰石珠的附着，抑制多达97.7％的附着。

项目成果

Novel vaccine development strategy for inducing mucosal immunity

诱导粘膜免疫的新型疫苗开发策略

• 发表时间: 2012
• 期刊: Expert Rev Vaccines
• 影响因子: 6.2
• 作者: Fukuyama Y.;et al
• 通讯作者: et al

A Combination of Flt3 Ligand cDNA and CpG Oligodeoxynucleotide as Nasal Adjuvant Elicits Protective Secretory-IgA Immunity to Streptococcus pneumoniae in Aged Mice

• DOI: 10.4049/jimmunol.1002837
• 发表时间: 2011-02-15
• 期刊: JOURNAL OF IMMUNOLOGY
• 影响因子: 4.4
• 作者: Fukuyama, Yoshiko;King, Janice D.;Fujihashi, Kohtaro
• 通讯作者: Fujihashi, Kohtaro

The Nasal Dendritic Cell-Targeting Flt3 Ligand as a Safe Adjuvant Elicits Effective Protection against Fatal Pneumococcal Pneumonia

• DOI: 10.1128/iai.01360-10
• 发表时间: 2011-07-01
• 期刊: INFECTION AND IMMUNITY
• 影响因子: 3.1
• 作者: Kataoka, Kosuke;Fujihashi, Kohtaro;Oishi, Kazunori
• 通讯作者: Oishi, Kazunori

Nasal dendritic cell targeting Flt3 ligand as a safe adjuvant elicits effective protection against fatal pneumococcal pneumonia

鼻树突状细胞靶向 Flt3 配体作为安全佐剂可有效预防致命性肺炎球菌肺炎

• 发表时间: 2011
• 作者: Kataoka K;et al;片岡宏介
• 通讯作者: 片岡宏介