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生物多様性を保つヒト唾液タンパク質由来能動・受動免疫型歯周病予防ワクチンの開発

开发基于主动/被动免疫的牙周病预防疫苗，该疫苗源自人类唾液蛋白，可保护生物多样性

基本信息

批准号：
23390481
负责人：
片岡宏介
金额：
$ 7.57万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011-04-01 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の当初の検討課題は、歯周病原菌と特異結合するヒト唾液タンパク質スタセリンおよびプロリンリッチプロテイン(PRP)上の最小結合部位アミノ酸配列を含むペプチドに対する、唾液IgA抗体による歯周病原菌の付着阻害効果をin vitroで検討することであった。1)まず、スタセリンおよびPRP上の最小結合部位アミノ酸配列を含むペプチド(Stat23およびPRP21)を作製・精製し、キャリアータンパク(KLH)に結合させ(多価)ペプチド複合体を作製すること。2)それらペプチド複合体を抗原とし、粘膜アジュバント(コレラトキシン(CT)、CpGオリゴDNA、Flt3L遺伝子配列をコードしたタンパク質発現DNAプラスミド)とともにマウスに経鼻投与し、唾液中に誘導される抗ペプチドIgA抗体を精製すること。3)その精製IgA抗体をインヒビターとして用い、それによる歯周病原菌の付着・定着阻害能を口腔内歯面モデルにて検討すること。であった。結果は、1)ペプチド合成をFmoc法により作製を試みたが、経済的、技術的な面で当初の作製予定量が確保できないと予想され、専門業者に外部注文した。2)2種の抗原および3種の粘膜アジュバントを組み合わせ、マウスに経鼻投与した。抗原特異的IgA応答を認めたものは、PRP21抗原のみであった。そのPRP21抗原に対する唾液IgA抗体の産生量について、最も効果の高い粘膜アジュバントは、CTであった。以後CTとPRP21を経鼻同時投与し、抗PRP21特異的唾液IgA抗体を精製し、約150匹のマウスから精製IgA抗体24.3mgが精製された。3)その精製IgA抗体溶液100μg/ml 100μLによるPRP被覆ハイドロキシアパタイトビーズへの歯周病原菌(P.gingivalis ATCC 33277)の付着阻害実験を行ったところ、最大97.7%の付着阻害が認められた。

This year の had の検は, 歯 weeks for subject specific pathogen と combining するヒト saliva タンパク qualitative スタセリンおよびプロリンリッチプロテイン (PRP) on the minimum の combining site アミノ acid with column を containing むペプチドにす seaborne る, saliva IgA antibodies による歯 weeks pathogen の pay the resistance against unseen fruit を in vitroで検 ask for するとであったとであった. 1) まず, スタセリンおよび PRP の minimum combining parts アミノ acid with column を containing むペプチド (Stat23 および PRP21) を cropping, refined し, キャリアータンパク (KLH) にさせ (価) ペプチド complex を cropping すること. 2) それらペプチド complex を antigen とし, mucous membrane アジュバント (コレラトキシン (CT), CpG オリゴ traces of DNA, Flt3L 伝 with sequence をコードしたタンパク qualitative 発 now DNA プラスミド) とともにマウスに経 and し, saliva of nasal に induced される resistance ペプチド IgA antibodies を refined するこ Youdaoplaceholder0. 3) その refined IgA antibodies をインヒビターとしてい, それによる歯 weeks pathogen の, pay a fixed on resistance to harm, can を歯 in oral cavity surface モデルにて beg す検ること. Youdaoplaceholder0. Results は, 1) ペプチド synthetic を Fmoc method により cropping を try みたが, 経な surface で済, technology for the first quantitative がの as a system to ensure できないと to think され qiqi tushuo, 専 door industry に external した. 2) Two types of <s:1> antigens および and three types of <s:1> mucosa アジュバトをトを groups み combined with わせ and ウスにウスに were intranasally administered to the た. Antigen-specific IgA応 answer を recognize めた <s:1> <s:1> を, PRP21 antigen <e:1> みであった. その PRP21 antigen にす seaborne る saliva IgA antibodies discharge のについて, most も unseen high のい mucosa アジュバントは, CT であった. Subsequently, CTとPRP21を was administered intranasally simultaneously with <s:1>, anti-prp21-specific salival IgA antibody を refined <s:1>, approximately 150 pieces of <s:1> ウスらら refined IgA antibody 24.3mgが refined された. 3) その refined IgA antibodies solution 100 mu g/ml 100 mu L による PRP coating ハイドロキシアパタイトビーズへの歯 weeks pathogen (P.g ingivalis ATCC 33277) の pay the resistance against be 験を line ったところ, maximum 97.7% pay the resistance against がの recognize められた.