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生物多様性を保つヒト唾液タンパク質由来能動・受動免疫型歯周病予防ワクチンの開発

开发基于主动/被动免疫的牙周病预防疫苗，该疫苗源自人类唾液蛋白，可保护生物多样性

基本信息

批准号：
23390481
负责人：
片岡宏介
金额：
$ 7.57万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011-04-01 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度の当初の検討課題は、歯周病原菌と特異結合するヒト唾液タンパク質スタセリンおよびプロリンリッチプロテイン(PRP)上の最小結合部位アミノ酸配列を含むペプチドに対する、唾液IgA抗体による歯周病原菌の付着阻害効果をin vitroで検討することであった。1)まず、スタセリンおよびPRP上の最小結合部位アミノ酸配列を含むペプチド(Stat23およびPRP21)を作製・精製し、キャリアータンパク(KLH)に結合させ(多価)ペプチド複合体を作製すること。2)それらペプチド複合体を抗原とし、粘膜アジュバント(コレラトキシン(CT)、CpGオリゴDNA、Flt3L遺伝子配列をコードしたタンパク質発現DNAプラスミド)とともにマウスに経鼻投与し、唾液中に誘導される抗ペプチドIgA抗体を精製すること。3)その精製IgA抗体をインヒビターとして用い、それによる歯周病原菌の付着・定着阻害能を口腔内歯面モデルにて検討すること。であった。結果は、1)ペプチド合成をFmoc法により作製を試みたが、経済的、技術的な面で当初の作製予定量が確保できないと予想され、専門業者に外部注文した。2)2種の抗原および3種の粘膜アジュバントを組み合わせ、マウスに経鼻投与した。抗原特異的IgA応答を認めたものは、PRP21抗原のみであった。そのPRP21抗原に対する唾液IgA抗体の産生量について、最も効果の高い粘膜アジュバントは、CTであった。以後CTとPRP21を経鼻同時投与し、抗PRP21特異的唾液IgA抗体を精製し、約150匹のマウスから精製IgA抗体24.3mgが精製された。3)その精製IgA抗体溶液100μg/ml 100μLによるPRP被覆ハイドロキシアパタイトビーズへの歯周病原菌(P.gingivalis ATCC 33277)の付着阻害実験を行ったところ、最大97.7%の付着阻害が認められた。

At the beginning of this year, there was a special combination of pathogens in saliva, saliva, in vitro, saliva, and saliva. 1) the smallest joint site of the PRP was arranged with the combination of (Stat23) and (KLH), and the combination of the (multiplex) and the complex (multiplex) was used as the template. 2) the recombinant antigens, mucous membrane antigens (CT), CpG antigens, Flt3L antigens, Flt3L antigens, antigens, IgA antibodies in saliva, saliva and saliva. 3) the anti-IgA antibody was detected in the oral cavity, and the pathogen in the oral cavity. I'm sorry, I'm sorry. The results are as follows: 1) the synthetic Fmoc method was used to determine the quantity of information, information, and technology in the first place. 2) 2. Antigens, antigens, nasal cavities, nasal cavities. The antigen specific IgA answered the specific antigen and the PRP21 antigen. PRP21 antigen, saliva IgA antibody, CT antigen, saliva antibody, saliva, saliva and saliva. After that, CT PRP21 mice were intranasally injected with anti-PRP21 specific saliva IgA antibodies, and about 150 mice were injected with IgA antibodies 24.3mg antibodies. 3) the IgA antibody solution 100 μ g