軟骨代謝に対する新規コラーゲン結合蛋白RGD-CAPの影響

新型胶原结合蛋白RGD-CAP对软骨代谢的影响

• 批准号: 11771322
• 负责人: 大野 茂
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771322/
• 关键词: RGD-CAP; 軟骨; 細胞接着; インテグリン; RGD配列; 変形性関節症

平成11年度はRGD-CAPの発現についてはニワトリ軟骨組織よりRGD-CAP cDNAのクローニングに成功し、さらにRGD-CAPリコンビナント蛋白の発現を行った。このリコンビナント蛋白をウサギおよびマウスに免疫した結果、両者において、高い抗体価を示すポリクローナル抗体が作製できた。これらの抗体を用いて、発生段階におけるニワトリ胚における免疫染色を行った結果、軟骨分化過程における基質産生期から肥大期にかけてRGD-CAPが高レベルで存在することが明らかとなった。さらにリコンビナント蛋白を用いて軟骨細胞の接着活性を検討した結果、RGD-CAPは1mg/mlの濃度から軟骨細胞接着、伸展を促進した。RGD-CAPの接着活性はEDTAにより阻害され、2価の金属イオンを必要とし、しかもインテグリン中和抗体を用いた阻害実験を用いた結果、インテグリンα1およびβ1の中和抗体により阻害された。これらの結果から、RGD-CAPの接着活性はインテグリンα1β1を介することが明らかになった。平成12年度では、RGD-CAPと変形性関節症患者の軟骨病態との関連を検討した結果、顕著な関連性は見出せなかった。しかし、検体数を増やして、今後も検討を行って行く予定である。また、初期軟骨分化過程において、発生初期のニワトリ胚の免疫染色の結果、軟骨凝集塊や軟骨膜においてRGD-CAPが高発現していることが明らかとなり、未分化間葉系細胞が軟骨へ分化する過程で増加し、逆に骨に分化する過程で減少することが新たに明らかとなった。このことより、RGD-CAPは内軟骨性骨化の特に初期の段階で高発現し、細胞接着とともに、細胞増殖にも関与し、軟骨組織の成長に大きな役割を果たしていることが示唆された。

Pp.47-53 11 は RGD - CAP の 発 now に つ い て は ニ ワ ト リ cartilage よ り RGD - CAP cDNA の ク ロ ー ニ ン グ に successful し, さ ら に RGD - CAP リ コ ン ビ ナ ン ト protein の 発 line now を っ た. こ の リ コ ン ビ ナ ン ト protein を ウ サ ギ お よ び マ ウ ス に immune し た results, struck に お い て, high い antibody 価 を shown す ポ リ ク ロ ー ナ ル antibody が cropping で き た. を こ れ ら の antibody with い て, 発 Duan Jie に お け る ニ ワ ト リ embryo に お け る immune dyeing line を っ た results, cartilage differentiation に お け る matrix produce period か ら hypertrophy stage に か け て RGD - CAP が high レ ベ ル exist で す る こ と が Ming ら か と な っ た. さ ら に リ コ ン ビ ナ ン ト protein を with い て chondrocytes の then active を beg し 検 た results, RGD - CAP は concentration of 1 mg/ml の か ら cartilage cells, then extend を promote し た. RGD - CAP の then active は EDTA に よ り resistance against さ れ, 2 価 の metal イ オ ン を necessary と し, し か も イ ン テ グ リ ン neutralizing antibody を with い た resistance against be 験 を with い た results, イ ン テ グ リ ン alpha 1 お よ び beta 1 の neutralizing antibody に よ り resistance against さ れ た. The <s:1> れら <s:1> results of を ら, RGD-CAP <s:1> then the activity of ら ら テグリ テグリ <e:1> α1β1を intermediate する とが とが とが ら ら になった になった. Pp.47-53 12 で は, RGD - CAP と - morphic masato sufferer section の cartilage pathological と の masato even を beg し 検 た results, 顕 な masato even sex は shows せ な か っ た. し か し, 検 number を raised や し て, future も 検 line for を っ て line く designated で あ る. ま た, early cartilage differentiation に お い て, 発 born early の ニ ワ ト リ embryo の の immune dyeing results, cartilage agglutination block や perichondrium に お い て RGD - CAP が high 発 now し て い る こ と が Ming ら か と な り, undifferentiated mesenchymal cells が cartilage へ す る process で raised し, inverse に bone に differentiation す る reduce で す る こ と が new た に Ming ら か Youdaoplaceholder0. こ の こ と よ り, RGD - CAP は cartilaginous ossification の, early に の Duan Jie で high 発 し, cells then と と も に, cell rights colonization に も masato and し, cartilage の growth に big き な "を cut fruit た し て い る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

S.Ohno.et al.: "RGD-CAP(βig-h3)enhances the spreading of chondrocytes and fibroblasts via integrin α1β1"Biochimioca et Biophysica Acta. 1451. 196-205 (1999)

S.Ohno.等人：“RGD-CAP(βig-h3)通过整合素α1β1增强软骨细胞和成纤维细胞的扩散”Biochimioca et Biophysical Acta. 1451. 196-205 (1999)

K.Tanimoto et al.: "Proinflammatory cytokines regulate gene expression of hyaluronic acid synthetase in cultured rabbit synovial membrane cells"Connective Tissue Research. (In press). (2001)

K.Tanimoto 等人：“促炎细胞因子调节培养的兔滑膜细胞中透明质酸合成酶的基因表达”结缔组织研究。

S.Ohno et al.: "RGD-CAP (βig-h3) enhances the spreading of chondrocytes and fibroblasts via integrin α_1β_1"Biochimica et Biophysica Acta. 1451. 196-205 (1999)

S. Ohno 等人：“RGD-CAP (βig-h3) 通过整合素 α_1β_1 增强软骨细胞和成纤维细胞的扩散”Biochimica et Biophysical Acta. 1451. 196-205 (1999)

S.Makihira et al.: "Enhancement of Cell Adhesion and Spreading by a Cartilage-Specific Noncollagenous Protein, Cartilage Matrix Protein (CMP/Matrilin-1), via Integrin α_1β_1"The Journal of Biological Chemistry. 274・16. 11417-11423 (1999)

S. Makihira 等人：“软骨特异性非胶原蛋白、软骨基质蛋白 (CMP/Matrilin-1) 通过整合素 α_1β_1 增强细胞粘附和扩散”《生物化学杂志》274·16。 (1999)

K.Honda et al.: "The effects of high magnitude cyclic tensile load on cartilage matrix metabolism in cultured chondrocytes"European Journal of Cell Biology. 79. 601-609 (2000)

K.Honda 等人：“高强度循环拉伸载荷对培养软骨细胞中软骨基质代谢的影响”欧洲细胞生物学杂志。