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ウイルス遺伝子転写抑制エレメントに結合する因子のcDNAクローニング

与病毒基因转录抑制元件结合的因子的 cDNA 克隆

基本信息

批准号：
11771454
负责人：
内海文彰
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771454/
关键词：
MMTVプロモーター Sμbp-2 DNAヘリカーゼ cDNAクローニング Sμbp2 ゲルシフトアッセイ

项目摘要

昨年度までにMMTVプロモーター中に存在する50-bpの負の制御エレメントに結合するタンパク質としてSμbp-2をコードするcDNAが得られている。また、このcDNAをpETベクターに組み込むことによってTrx-Hisタグ融合タンパク質も作製されている。このSμbp-2融合タンパク質を用いてゲルシフトアッセイを行ったところMMTVプロモーター50-bp中のACTGモチーフを認識することが明かとなった。現在、Sμbp-2発現ベクターをMMTVプロモーターのレポータープラスミドと共にL929細胞に導入し、MMTV遺伝子の転写に及ぼす影響ついて検討しており、現在投稿準備中である。また、Sμbp-2のC末端領域に対する抗体もすでに調整されており、これがレコンビナントタンパク質および細胞抽出物中のSμbp-2タンパク質を認識することがウエスタンブロット法によって確かめられている。Sμbp-2はDNAヘリカーゼモチーフを持つ特殊な転写制御因子として機能する可能性がある。今後は抗Sμbp-2抗体を用いて転写制御に関わるタンパク質との相互作用を検討する予定である。また、Sμbp-2ノックアウトマウスを作製することによって実際のSμbp-2タンパク質の生理的な機能を解明する実験を東京理科大・水田博士との共同研究として進める予定である。

The 50-bp cDNA fragment was found in the MMTV genome last year. The cDNA sequence is encoded in the Trx-His cDNA sequence. The Sμbp-2 fusion protein is used to identify the ACTG in MMTV 50-bp. Now, the Sμbp-2 gene is being introduced into L929 cells, and the MMTV gene is being written and affected. The C-terminal domain of Sμ bp-2 is associated with the regulation of the antibody in the cell extract and the Sμbp-2 protein in the cell extract. Sμbp-2 has the potential to hold special control factors and functions in DNA. In the future, anti-S μbp-2 antibodies will be used to control the interaction between the two substances. The physiological function of S μ bp-2 protein was clarified by joint research by Dr. Ida and Tokyo University of Science.