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翻訳開始因子eIF4E、eIF4G、mRNA複合体の溶液構造解析

翻译起始因子 eIF4E、eIF4G 和 mRNA 复合物的溶液结构分析

基本信息

批准号：
11780427
负责人：
松尾浩
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780427/
关键词：
翻訳開始因子 NMR Cap RNA 安定同位体標識

项目摘要

翻訳開始因子の一つであるeIF4E蛋白質はmRNAの5'末端に付加されたキャップ構造(m^7GpppN,Nは任意の塩基)を認識して結合し,mRNAをリボゾーム4OSサブユニットに結合させる過程で不可欠な働きをする。mRNAの塩基とeIF4E蛋白質の間の相互作用をNMRを用いて調べるためにはキャップ構造を持つ^<15>N,^<13>C安定同位体標識されたRNAが必要である。我は、化学合成とプライマーゼを用いた酵素合成を組み合わせ、キャップ構造(m^7GpppA)を持つ安定同位体標識されたRNAの効果的な合成法をした。キャップ構造(m^7GpppA)は化学的に合成した。異なる金属によって個々に活性化される二つのリン酸付加反応部位を持つ反応試薬(Oー8-(5-chloroquinoly1)S-phenyl phosphate)を用いて、m^7G^5PとA^5pを付加したリン酸でつなぎ5',5'三リン酸橋を形成させた。次に、このキャップ構造アナログ(m^7GpppA)に酵素合成によって塩基を付加した。我々が用いたbacteriophage T7 gene4 primaseはキャップ構造アナログを普通のリボヌクレオチドと同様の効率で取り込むことが出来る。また、合成する一番目の塩基としてアデニンに高い選択性があるため、m^7Gの3'に塩基が付加される反応が起こらず、効率的に目的のRNAを合成する。我々はこの方法を用いてm^7Gppp^<13C,15N>ACCとm^7GpppA^<13C,15N>C^<13C,15N>Cを合成し、eIF4E蛋白質との相互作用を解析した。eIF4E蛋白質とアデノシンに化学シフトの変化とシグナル線幅の広がりが観測されたが、はっきりとした分子間のNOEは観測されなかった。eIF4E蛋白質のリン酸化や他の翻訳開始因子(eIF4G)とeIF4E蛋白質の結合がmRNAとの結合を強くするという報告があるので、それらを構造生物学を用いて研究することが今後の課題である。

The initiation factor of eIF4E protein binds to the 5'end of mRNA by adding a protein structure (m^7GpppN, N), and the mRNA binds to the 5' end of eIF4E protein by adding a protein structure (m^7GpppN, N). The interaction between mRNA and eIF4E protein is necessary for NMR <15><13>to modulate the structure of RNA. I want to use the enzyme synthesis method to synthesize RNA. The structure (m^7GpppA) is chemically synthesized. In addition to the active sites of the two different metals, the active sites of the two different acids were also tested by the reaction of (O-8-(5-chloroquinoly1)S-phenyl phosphate), and the formation of 5',5'-triphenyl acid bridges by the addition of the two different acids. In addition, the enzyme synthesis in the enzyme synthesis system was enhanced by the addition of the enzyme structure (m^7GpppA). I used the bacteriophage T7 gene4 primase to reverse the structure of the virus. The RNA synthesis of a target gene is highly selective, and the RNA synthesis of a target gene is highly selective. The method was used to analyze the interaction of eIF4E protein and m^7Gppp ^<13 C, 15N>ACC ^<13 C, 15 N>C^<13C,15N>. eIF4E protein is the most important protein in the world. eIF4E Protein Activation and Other Transcription Initiation Factors (eIF4G) and eIF4E Protein Binding to mRNA and Binding to mRNA are reported as future research topics.