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可視化システムを用いたプロテインキナーゼCのターゲティング機構の解析

利用可视化系统分析蛋白激酶C靶向机制

基本信息

批准号：
11780448
负责人：
白井康仁
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780448/
关键词：
PKC 脂肪酸 C1ドメインホスホリパーゼA2 ターゲッティング

项目摘要

本研究は、「PKCの多様なタ一ゲッティングを調節する機構を分子レベルで解明すること」を目的としている。本年度は、計画1(ターゲッティングに関与するepsilon PKC分子内ドメインの決定)に焦点を絞り実験を行った。実際には、蛍光蛋白質で標識したepsilon PKCの変異体を作製し、ホルボールエステルと、各脂肪酸によるトランスロケーション様式を解析した。その結果、ステアリン酸による細胞質膜ヘのトランスロケーションには、疑似基質領域付近とClBドメインが重要であるのに対して、アラキドン酸やリノール酸によるゴルジ体へのトランスロケーションにはClBドメインが必須であることを明らかにした。また、このClBドメインをCHO-K1細胞内に発現させるとゴルジ体に集積することから、このドメイン内にゴルジ体と相互作用する部位が存在することも明らかにした。一方、TPAによる細胞質膜への不可逆的なトランスロケーションには、C1BドメインとClAドメインが関与しており、このうち主にClBドメインが重要であることが明らかになった。さらに、脂肪酸などの脂質シグナルとそれを産生するホスホリパーゼA2が、受容体を介したPKCのトランスロケーションに関与していることを明らかにし、Journal of Cell Scienceに報告した。今後、このC1Bドメインを中心として、計画2(脂質シグナルとPKCとの結合様式の解析)と計画3(ゴルジ体において、epsilon PKCと結合する分子の同定)を進めていく予定である。

The purpose of this study is to clarify the mechanism of PKC regulation. This year, we will continue to focus on Plan 1(Decision on the Intramolecular Device of Epsilon PKC during the Tagajitetinen Project). In the meantime, the protein identification of epsilon PKC is discussed. As a result, the plasma membrane of the cell is very close to the ClB surface. In CHO-K1 cells, there are sites for cell aggregation and interaction that occur within the cell. On the one hand, TPA can cause irreversible changes in the plasma membrane, and on the other hand, C1B can cause changes in the plasma membrane. In addition, fatty acids and lipids are produced in a variety of ways, such as in the case of protein receptors, and in the case of protein receptors, the Journal of Cell Science reports In the future, this C1B model will be further developed into the following: Project 2(analysis of lipid and PKC binding patterns) and Project 3(molecular identification of lipid and epsilon PKC binding patterns).