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CキナーゼとDGキナーゼの脂質性シグナルによる標的認識機構の解明

通过C激酶和DG激酶的脂质信号阐明靶标识别机制

基本信息

批准号：
13780507
负责人：
白井康仁
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

プロテインキナーゼC(PKC)及びジアシルグリセロールキナーゼ(DGK)の脂質性シグナルによるサブタイプ特異的標的認識(ターゲティング)機構を解明する目的で、εPKC及びDGKγの変異体とGFPとの融合蛋白質を作製し、脂質性シグナルによる動態をコンフォーカルレーザー顕微鏡で観察した。その結果、1,C1Bドメインを変異(欠損または点変異)させたεPKCは、アラキドン酸(AA)及びセラミドによるゴルジ体へのターゲティングが消失したことから、これらの脂質性シグナルによるターゲティングにはC1Bドメインが関与していることが明らかになった。2,δPKCは、セラミドによりゴルジ体へターゲティングされるが、AAには応答しない。そこで、εPKCのC1BドメインをδPKCのC1Bに入れ替えたキメラを作製したところ、AAに応答しなくなった。反対に、εPKCのC1BドメインをもつキメラδPKCは、AAに応答するようになった。これらのことから、εPKCとδPKCのAAに対する応答能の違いは、それぞれのC1Bが決定づけていることが明らかになった。3,DGKγはAA及びTPAにより細胞質膜へターゲティングされる。C1Bドメインを欠損させるとAAによるターゲティングは消失したが、C1Aドメインを欠損させてもAAによるターゲティング能は有していた。一方、C1Aドメインを欠損させるとAAに対する応答能は保持していたが、TPAには応答しなくなった。このことから、DGKγのAA応答にはC1Bドメインが、TPA応答にはC1Aドメインが重要でり、TPAとAAに応答するモチーフはそれぞれ独立していることが明らかになった。

The mechanism for understanding the lipid profile of protein C(PKC) and DGK (DGK) and the dynamics of GFP fusion protein production and lipid profile were investigated under microscope. As a result, 1, C1B-based equipment has changed (underloss and negative point change) and εPKC has disappeared from the basic equipment of the general body such as Alacidin acid (AA) and Alacidin acid. This makes it clear that the basic equipment of this fatty system is related to C1B-based equipment. 2,δPKC, PKC and C1B are the most important components of the system. C1B, PKC, AA, etc. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with someone else. 3. DGKγ-AA and TPA C1B has a deficit in AA. C1A has a deficit in AA. A party, C1, A, B, C, A, C, A, D, C, D, E, D, D, E, E, F, E, E, The AA response of DGKγ is independent of the AA response of TPA γ and C1B γ. The AA response of TPA γ is independent of the AA response of TPA γ and C1A γ.