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ヒメツリガネゴケを用いたサイトカイニン合成系、情報伝達系関連遺伝子の単離と解析

利用苔藓立碗藓分离并分析细胞分裂素合成系统和信息转导系统相关基因

基本信息

批准号：
12740449
负责人：
藤田知道
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

1、ヒメツリガネゴケ完全長cDNAライブラリー作成と塩基配列情報のデータベース化既存の無処理、オーキシン処理に加え、サイトカイニン処理した原糸体由来の完全長ライブラリーを作成した。この3種類から合計4万のcDNAクローンの塩基配列を両末端から決定し、そのほとんどを一般公開した。これらのデータと既公開のものをあわせた統合ヒメツリガネゴケデータベースを構築した。2、サイトカイニン応答異常変異体の単離(1)スクリーニングの効率を高めるため、完全長cDNAをヒメツリガネゴケの単離プロトプラストに導入し一過的に過剰発現させ、サイトカイニン応答が異常になる変異体を同定できる系を構築した。また、このための一過的過剰発現用ベクターを新たに作成した。(2)異なるサイトカイニン、オーキシン濃度を組み合わせた培地におけるヒメツリガネゴケの単離プロトプラストの再生過程を調べた。サイトカイニン濃度が高くなるにつれて、再生5細胞目から多数の頂端細胞からなると思われる細胞塊が誘導された。この基礎データは、過剰発現変異体をスクリーニングする際の1つの指標として用いた。(3)サイトカイニンとオーキシン添加再生培地下でも正常な形態の原糸体を再生させたものやホルモン無添加再生培地において側枝頂端細胞の形態が異常になったもの、さらには通常オーキシン添加時でのみ見られるカウロネマ細胞が無添加培地において分化してきたものなど、過剰発現によりサイトカイニンやオーキシンに対する応答性に影響を与えた遺伝子を10種類同定することができた。これらのクローンを基にしたより詳細な解析を行っていくことで、サイトカイニンの作用機構に関する制御系の一端が明らかになると考える。

1. Complete length cDNA generation, complete length cDNA generation. The total number of cDNA fragments in these three species is 40,000. This is the first time I've ever been in a position to do this. 2. The abnormal variant of the protein is isolated from the protein.(1) The efficiency of the protein is high. The complete cDNA is isolated from the protein. The protein is introduced into the protein. The abnormal variant of the protein is isolated from the protein. This is the first time that I've ever been to a place where I've been to a place. (2)The concentration of different substances in the culture medium is adjusted by the regeneration process. 5 cells were regenerated and most of the apical cells were induced. This is the first time that the basic data has been changed, and the indicators have been used. (3)In addition to the regeneration culture, the original cells of the normal morphology are regenerated. In addition to the regeneration culture, the apical cells of the normal morphology are regenerated. In addition to the regeneration culture, the apical cells of the normal morphology are regenerated. The impact of accidental discovery on the responsiveness of the service can be determined in the same way as 10 types of genes. A detailed analysis of the relationship between the control system and the operating mechanism