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トリプルジーンブロックのウイルス細胞間移行における機能と役割

三基因块在病毒细胞间运动中的功能和作用

基本信息

批准号：
12760028
负责人：
磯貝雅道
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Iwate University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

リンゴステムピッティングウイルスのゲノムにコードされる3つのTGBタンパク質(TGBp1,TGBp2,TGBp3)に蛍光タンパク質(GFP)を融合したものを細胞内でトランジェントに発現させて各TGBタンパク質の細胞内局在解析した。トランジェント発現コンストラクトは、大腸菌プラスミドベクターに35Sプロモーター、その下流に各TGBタンパク質の遺伝子とそれにインフレームでGFPを結合して作製した(pTGBp1-GFP,pTGBp2-GFP,pTGBp3-TGB)。これらコンストラクトをパーティクルガン法により宿主植物であるNicotiana occidentalis表皮細胞に導入して、GFPを融合した各TGBタンパク質の細胞内局在をGFP蛍光により共焦点レーザー顕微鏡で観察した。TGBp1-GFPでは糸まり状の構造物、TGBp2-GFPでは皮層の網状の構造物とその上に存在する球状小胞、TGBp3-GFPでは皮層の網状の構造物にGFPの蛍光が観察された。これら局在は、GFPのみを発現させた場合には観察されない特異的なものであった。さらに、TGBp1-GFPをGFPの融合していないTGBp2あるいはTGBp3と同時にトランジェント発現させてもTGBp1-GFPの細胞内局在に変化はなかったが、TGBp1-GFPをTGBp2およびTGBp3と同時に発現させるとTGBp1-GFPの細胞内局在が劇的に変化して細胞の周辺部に数個の固まりとして移動した。そこで、各TGBタンパク質を同時に発現させたときの細胞内局在を、GFPの変異体であるCFPとYFPを用いて蛍光顕微鏡下での二重標識実験を行った。その結果、TGBp1はTGBp2とTGBp3と同時に発現させることにより、TGBp2とTGBp3が共に局在している細胞の周辺部に特異的に局在を変化させることが示唆された。

The TGB protein (TGBp1, TGBp2, TGBp3), GFP, GFP The expression of GFP (pTGBp1-GFP, pTGBp2-GFP, pTGBp3-TGB) in the downstream of the TGB gene was detected by PCR and the expression of GFP (pTGBp2-GFP, pTGBp3-TGB) was detected by PCR. The host plant Nicotiana occidentalis was introduced into the cell by GFP fusion, and each TGB cell was observed by confocal microscopy. TGBp1-GFP has a cortical reticular structure, TGBp2-GFP has spherical vesicles on the cortical reticular structure, and TGBp3-GFP has a cortical reticular structure. This is the case when GFP is detected. In addition, TGBp1-GFP fusion occurs in TGBp2 and TGBp3 simultaneously, and TGBp1-GFP intracellular localization changes in TGBp2 and TGBp3 simultaneously. In addition, TGB and YFP can be detected simultaneously by fluorescence microscopy. TGBp 1 and TGBp 2 are simultaneously detected in the peripheral part of the cell.