Analysis of plant defense mechanisms against seed transmission of plant viruses

R4年度は、ラズベリー黄化ウイルス(raspberry bushy dwarf virus, RBDV)のNicotiana benthamiana（ベンサミアーナ）における種子伝染阻害とRNAサイレンシングとの関連を解析するため、以下の２つの解析を行った。(1) ベンサミアーナにおける、植物RNAウイルスに対するRNAサイレンシングの重要因子であるNbDCL2とNbDCL4、およびNbRDR6の発現をゲノム編集により停止させたベンサミアーナでのRBDVの種子伝染率を解析した。RBDVに感染したNbDCL2とNbDCL4の発現を停止したベンサミアーナ(dcl2dcl4)を、健全dcl2dcl4の花粉を用いて人工授粉し、種子を得て、それら種子から生育させた実生のウイルス感染（種子伝染）を調べたが、種子伝染した個体は検出されなかった。さらに、NbRDR6の発現を停止したベンサミアーナにおいてもRBDVの種子伝染を解析したが、種子伝染した個体は検出されなかった。これらのことから、ベンサミアーナにおけるRBDVの種子伝染阻害には、RNAサイレンシングは主要な役割を担っていないと考えられた。(2) RBDV感染ベンサミアーナ由来の胚のうにおけるウイルス局在解析を行った。胚珠内部に存在する胚のうでのウイルス局在を解析したところ、卵細胞にウイルスが局在していることが示された。昨年度の研究結果と合わせると、卵細胞がウイルスに感染しているにもかかわらず、健全精細胞との受精により形成された胚にウイルスが検出されないことが示された。つまり、受精後、RNAサイレンシングと異なったメカニズムにより、胚からRBDVを排除する種子伝染防御機構をベンサミアーナが備えている可能性を示唆した。

R4年度は、ラズベリー黄化ウイルス(raspberry bushy dwarf virus, RBDV)のNicotiana benthamiana（ベンサミアーナ）における種子伝染阻害とRNAサイレンシングとの関連を解析するため、以下の２つの解析を行った。(1) ベンサミアーナにおける、植物RNAウイルスに対するRNAサイレンシングの重要因子であるNbDCL2とNbDCL4、およびNbRDR6の発現をゲノム編集により停止させたベンサミアーナでのRBDVの種子伝染率を解析した。RBDVに感染したNbDCL2とNbDCL4の発現を停止したベンサミアーナ(dcl2dcl4)を、健全dcl2dcl4の花粉を用いて人工授粉し、種子を得て、それら種子から生育させた実生のウイルス感染（種子伝染）を調べたが、種子伝染した個体は検出されなかった。さらに、NbRDR6の発現を停止したベンサミアーナにおいてもRBDVの種子伝染を解析したが、種子伝染した個体は検出されなかった。これらのことから、ベンサミアーナにおけるRBDVの種子伝染阻害には、RNAサイレンシングは主要な役割を担っていないと考えられた。(2) RBDV感染ベンサミアーナ由来の胚のうにおけるウイルス局在解析を行った。胚珠内部に存在する胚のうでのウイルス局在を解析したところ、卵細胞にウイルスが局在していることが示された。昨年度の研究結果と合わせると、卵細胞がウイルスに感染しているにもかかわらず、健全精細胞との受精により形成された胚にウイルスが検出されないことが示された。つまり、受精後、RNAサイレンシングと異なったメカニズムにより、胚からRBDVを排除する種子伝染防御機構をベンサミアーナが備えている可能性を示唆した。