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マイナス鎖RNAウイルス遺伝子操作系の確立に関する基礎的研究

建立负链RNA病毒基因操作系统的基础研究

基本信息

批准号：
12760033
负责人：
近藤秀樹
金额：
$ 0.32万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760033/
关键词：
植物ウイルスマイナス鎖RNAゲノム遺伝子操作系

项目摘要

植物マイナス鎖RNAウイルス遺伝子操作系の確立に向けて、ランえそ斑紋ウイルス(ラブドウイルス)の複製酵素を解析するとともに、ゲノムの転写、複製などに関与するシグナルの解析を行った。1.ウイルスの複製、転写シグナル配列の解析:RNA1には5種のタンパク質、RNA2には推定複製酵素をコードされるが、それぞれはモノシストロニックなmRNAとして発現していることがわかった。遺伝子の結合領域には転写の終結配列、介在配列、転写の開始配列が高度に保存されていた。ゲノム3'末端部の非コード領域(リーダー配列)も転写されていることが確認され、ウイルスの転写、複製に重要な働きをしているものと推定された。2.ウイルス複製酵素の解析:RNA2の212kDaタンパク質はラブドウイルスとの相同性解析により複製酵素であると考えられる。この遺伝子のmRNAは他のウイルス遺伝子のmRNAに比べて発現量は少ないものであった。この推定複製酵素の一部領域を大腸菌で発現させ、ウサギに免疫して得られた抗血清により、本タンパク質が粒子内に微量存在することが確認された。このことから、ウイルスの感染にはこの推定複製酵素の供給が必須であると示唆された。3.ウイルスcDNAのクローニング:ゲノムRNA両端を持つ人工ミニゲノムの作製を行い、GFPをマーカー遺伝子として導入した。さらに、RNA1およびRNA2に対応する各ゲノム全長cDNAのクローニングを行った。これらからin vitroで目的サイズの転写産物を得ることができた。以上、本研究課題では植物のマイナス鎖RNAウイルス遺伝子操作系の確立に向け、その基礎的データが得られたものと期待される。

Plant DNA sequence analysis of replication enzymes for the establishment of DNA sequence analysis of DNA sequence. 1. The analysis of replication and transcription of mRNA:RNA1, RNA2, mRNA 3, mRNA 4, mRNA 6, mRNA 7, mRNA 8, mRNA 9, mRNA 9 The combination field of the gene is composed of the final arrangement, the intermediate arrangement, and the initial arrangement of the gene. The non-female field at the 3'end of the list is identified, copied, and presumed. 2. Analysis of replicase:RNA2 of 212kDa protein and its identity analysis. The expression of mRNA of the gene is less than that of the gene. This putative replicative enzyme is found in a small amount in Escherichia coli, and its immune response is confirmed. The supply of putative replicase is essential for infection. 3. The cDNA sequence: RNA sequence, GFP sequence, RNA sequence. Each of the three genes, RNA1 and RNA2, was cloned into a cDNA library. The purpose of this article is to create a new product for the future. The above research topic is to establish the direction and expectation of plant RNA gene operation system.