ラット精巣におけるSKD3の機能解析

大鼠睾丸中SKD3的功能分析

• 批准号: 12760194
• 负责人: 本道 栄一
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760194/
• 关键词: ラット; 精巣; SKD3

近年、哺乳類精細胞分化における熱ショック蛋白質(HSP)の重要性がクローズアップされ、新たなメンバーがクローニングされるようになった。しかし、その機能のみならず局在すら明らかになっていないものが多い。本研究では、新たにクローニングしたHSPファミリーのひとつであるラットSKD3を用いて、そのmRNAおよびアミノ酸構造及び精巣における局在といった基礎データを収集するとともに、機能の全貌を明らかにし、精子発生の分子機構を明らかにすることを目的とした。予備実験で行ったmRNAの精巣における局在および作製した抗体を用いたSKD3蛋白質の局在、mRNAの組織特異的発現パターン、腫瘍株化ライディッヒ細胞(LC540)におけるSKD3蛋白質の局在について再調査した。次に、真核細胞発現ベクターにSKD3遺伝子を組み込み、LC540細胞に導入した(電気穿孔法)。導入したLC540細胞におけるSKD3蛋白質の変動をwestern blottingにより解析したところ、発現量は想定されるよりも少なかった。これらの成果については論文報告した。さらにSKD3遺伝子を導入したLC540細胞の形態を光学顕微鏡を用いて観察した。結果、光学顕微鏡の解像レベルでは、遺伝子を導入していないLC540細胞との有意な違いは認められなかった。今年度は、さらに同LC540細胞を用いて、細胞内の各種ステロイド代謝酵素の変動を検討した。結果、SKD3には、ステロイド代謝を制御する作用がないように思われた。SKD3蛋白質のライディッヒ細胞における分布から考えて、SKD3は分子シャペロンとしての作用を強く持つ可能性が考えられた。

In recent years, the importance of mammalian sperm cell differentiation has been increasing. There are so many different kinds of functions in the world. This study aims to clarify the basic structure of SKD3, its function and molecular mechanism of sperm production. SKD3 protein was re-investigated in vitro in preparation for mRNA expression in vitro and in vivo in vitro for antibody production, tissue-specific mRNA expression in vitro and in vitro in tumor cells (LC540). In addition, eukaryotic development, SKD3 gene assembly, LC540 cell introduction (electroporation) The expression of SKD3 protein in LC540 cells was determined by Western blotting. The results of the paper were reported. SKD3 gene was introduced into LC540 cells and the morphology of LC540 cells was observed by optical microscopy. The results showed that the image resolution of the optical microscope was reversed and the gene was introduced into the LC540 cells. This year, the same LC540 cells were used to investigate the activity of various metabolic enzymes in the cells. Results: SKD3 has a positive effect on metabolism. SKD3 protein distribution in the cell, SKD3 molecular selection of the role of strong and persistent

项目成果

Kurohmaru M,Mizukami T,Kanai Y,Hondo E et al.: "A lectin-histochemical study on the seminiferous epithelium of the northern smooth-tailed tree shrew (Dendrogale murina) and the Java tree shrew (Tupaia javanica)."Okajimas.Folia.Anat.Jpn.. 77. 63-68 (2000)

Kurohmaru M、Mizukami T、Kanai Y、Hondo E 等人：“北方滑尾树鼩 (Dendrogale murina) 和爪哇树鼩 (Tupaia javanica) 生精上皮的凝集素组织化学研究。”Okajimas。

Cruzana BC.Hondo E.Kitamura N et al.: "Differential localization of immunoreactive alpha-and beta-subunits of S-100 protein in feline testis."Anat.Histol.Embryol.. 29. 83-86 (2000)

Cruzana BC.Hondo E.Kitamura N 等人：“猫睾丸中 S-100 蛋白免疫反应性 α 和 β 亚基的差异定位。”Anat.Histol.Embryol.. 29. 83-86 (2000)

Kitamura N, Tanimoto A, Hondo E et al.: "Immunohistochemical study of the ontogeny of prochymosin-and pepsinogen-producing cells in the abomasum of sheep"Anat. Histol. Embryol. 30. 231-235 (2001)

Kitamura N、Tanimoto A、Hondo E 等人：“绵羊皱胃中原凝乳酶和胃蛋白酶原产生细胞的个体发育的免疫组织化学研究”Anat。

林良博, 橋本善春(監訳): "犬の解剖アトラス"学窓社(印刷中).

Yoshihiro Hayashi、Yoshiharu Hashimoto（监督翻译）：《狗的解剖图谱》Gakusosha（出版中）。

日本獣医学会編: "獣医組織学(第2版)"学窓社. 315 (2001)

日本兽医学会编：《兽医组织学（第2版）》Gakusosha 315（2001）。