線虫(C.elegans)を用いた外因性内分泌撹乱化学物質の影響評価手法の確立

建立利用秀丽隐杆线虫评估外源性内分泌干扰化学物质影响的方法

• 批准号: 12760215
• 负责人: 星 英之
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760215/
• 关键词: 内分泌撹乱化学物質; 影響評価; トリブチルスズ; 線虫; RAP-PCR; 生殖細胞; アポトーシス; 環境ホルモン; 生殖毒性; バイオアッセイ; 17β-エストラジオール; ビスフェノールA; Caenorhabditis elegans; 1世代影響

前年度に研究者は線虫(C. elegans)卵巣内の生殖細胞(GC)数を指標とした内分泌撹乱化学物質(ED)の新規影響評価法を確立した。本年度は、EDの中でもその作用機序に関する情報が少ない塩化トリブチルスズ(TB)について、曝露時のGC数の減少とアポトーシスの関係およびRNA arbitary primed (RAP) PCR法による変動遺伝子の同定を試みた。最初に、TB曝露によるGC減少に対するアポトーシスの関与を検討する目的で以下の実験を行った。TBを10^<-10>-10^<-6>Mを含むコレステロール無添加NGM寒天培地に定法により単離した卵を載せ20℃で4日間培養を行った。GCのアポトーシス陽性細胞の検出は、蛍光色素SYT012で染色後、蛍光顕微鏡下で観察することで行った。線虫のアポトーシス関連遺伝子(ced-3)の発現量の比較は、半定量的RT-PCRにより行った。非曝露群と比較して、いずれの濃度のTB曝露群においても、GCのアポトーシス陽性細胞数およびced-3の発現量には、差が認められなかった。このことから、TB暴露によるGC数の減少には、アポトーシスが関与していない事が明らかになった。RAP PCR法については、液体培地により大量培養した線虫(卵〜成虫)を2群に分け、終濃度10^<-6>MのTBを含むバッファーとTB無添加バッファーでさらに24時間培養後、mRNAを調製することによって行った。その結果、TB曝露群と非曝露群の間で、hsp70(ヒートショックプロテイン遺伝子の一種)およびvit-2(ビテロジェニン遺伝子の一種)の発現量に有意な差を認めた。RAPPCR法については、今後もTB曝露により変動する遺伝子の同定を行っていく。本研究により、線虫を実験動物として用いるEDの影響評価法が有効であることが明らかになった。

The previous year, the researcher was a worm (C. An indicator of the number of germ cells (GC) in the eggs and a new assessment method for the effects of endocrine disrupting chemicals (ED) were established. This year, we conducted a series of experiments on the relationship between the information on the mechanism of action of ED and TB, the reduction of GC number during exposure and the identification of RNA arbitrary primed (RAP) PCR. The following are the objectives of the initial, TB exposure and GC reduction TB 10 - <-10>10 <-6>° C without NGM cold culture method The positive cells of GC were detected by fluorescent dye SYT012 and observed under microscope. A comparison of the expression of ced-3 gene in different species of C. elegans was performed by semi-quantitative RT-PCR. The number of positive cells in GC and the amount of detection of ced-3 in non-exposed groups were compared with those in exposed groups. The number of GC decreases due to TB exposure, and the number of GC decreases due to TB exposure. RAP PCR method is used to culture large numbers of worms (eggs ~ adults) in liquid culture, divide them into 2 groups, and finally concentrate TB at 10^<-6>M. After 24 hours of culture, mRNA modulation is carried out. The results showed that there were significant differences between TB exposure group and non-exposure group, and the occurrence of hsp70 (a type of vit-2) and vit-2(a type of vit-2). RAPPCR is a method for determining the identity of genes in TB exposure. This study was conducted on the basis of an evaluation of the effects of animal and animal diseases.

项目成果

Hidenobu HOSHI, Yoichi KAMATA, Takashi UEMURA: "A Simple Method (CEGST Assay) to Determine a Endocrine-Disrupting Effect Using Caenorhabditis elegans as a Bioassay"Environmental Sciences. 8(2-3). 172-172 (2001)

Hienobu HOSHI、Yoichi KAMATA、Takashi UEMURA：“使用秀丽隐杆线虫作为生物测定来确定内分泌干扰作用的简单方法（CEGST 测定）”环境科学。

Hoshi H.,Kamata Y.and Uemura T: "A Simple Method (CEGST Assay) to Determine a Endocrine-Disrupting Effect Using Caenorhabditis elegans as a Bioassay (in press)"Environmental Sciences. 8(2-3). (2001)

Hoshi H.、Kamata Y. 和 Uemura T：“使用秀丽隐杆线虫作为生物测定来确定内分泌干扰效应的简单方法（CEGST 测定）（正在印刷中）”环境科学。