細胞増殖シグナルによるストレス応答遺伝子の発現制御機構

细胞增殖信号调控应激反应基因表达的机制

• 批准号: 12770065
• 负责人: 谷川 潤
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770065/
• 关键词: 細胞増殖制御; ストレス; c-Myb; p53

原がん遺伝子産物c-Mybは細胞増殖制御に関与する転写因子で、その発現は細胞周期のG1後期に上昇する。またc-Mybはcdc2、proliferating cell nuclear antigen、DNA polymerase alphaなどの発現調節を行っている事から、S期の誘導に関与していると考えられている。一方、癌抑制因子であるp53はDNAに損傷を与えるストレスに応答してG1サイクリンキナーゼの阻害タンパク質であるp21/waf1の転写を活性化し、G1停止を引き起こす事が知られている。我々は、c-Mybとp53が直接相互作用する事を見い出し、c-MybのDNA結合ドメインとp53の4量体結合ドメインが相互作用する事、p53はc-Mybによる転写の活性化を阻害する事などを明らかにした。さらに、293T細胞及びMolt4細胞抽出液を用いた免疫沈降実験から両者はin vivoにおいても結合する事が分った。さらに、ゲルシフト法を用いた解析から、p53はc-MybのDNAへの結合を阻害する事が分った。また、ルシフェラーゼレポターアッセイからc-Mybはp53による転写の活性化を阻害する事も分った。さらに、野生型及びp53欠損マウス由来MEFを用いたコロニーアッセイからp53はc-Mybによるトランスフォーメーションを抑制する事が分った。また、マウスM1細胞を用いた実験から、c-Mybによる細胞増殖の維持をp53が抑制する事も分った。c-Mybとp53が直接相互作用する事は、サイクリンキナーゼの阻害に加えて、p53による新たな細胞周期制御機構の存在が示唆される。

原始癌基因产物C-MYB是参与细胞增殖调节的转录因子，其表达在细胞周期中增加了G1晚期。此外，C-MYB调节Cdc2的表达，增殖的细胞核抗原，DNA聚合酶α和其他物质的表达，并被认为与S相诱导有关。另一方面，已知p53是一种抑制癌症，它会激活p21/waf1（一种G1 cyclin激酶的抑制蛋白）的转录，以响应损害DNA的压力，从而导致G1停滞。我们发现C-MYB和p53直接相互作用，表明C-MYB的DNA结合结构域和p53的四聚结合结构域相互作用，并且p53抑制了C-MYB的转录激活。此外，使用293T细胞和Molt4细胞提取物的免疫沉淀实验表明，两者都在体内结合。此外，使用凝胶移位方法的分析表明，p53抑制了C-MYB与DNA的结合。还发现C-MYB抑制了P53从荧光素酶报告基因测定法中抑制了转录的激活。此外，使用来自野生型和p53缺陷小鼠的MEF的菌落测定表明，p53抑制了C-MYB的转化。此外，使用小鼠M1细胞的实验表明，p53抑制了C-MYB对细胞增殖的维持。 C-MYB和p53之间的直接相互作用表明，除了抑制细胞周期蛋白激酶外，还存在p53的新细胞周期调节机制。

项目成果

Tanikawa J. et al.: "p53 Suppresses the c-Myb-induced Activation of Heat Shock Transcription Factor 3"The Journal of Biological Chemistry. 275. 15578-15585 (2000)

Tanikawa J. 等人：“p53 抑制 c-Myb 诱导的热休克转录因子 3 的激活”《生物化学杂志》。