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大腸菌O157における志賀毒素産生に関与する遺伝子の機能解析

大肠杆菌 O157 中志贺毒素产生相关基因的功能分析

基本信息

批准号：
12770145
负责人：
宮本裕史
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770145/
关键词：
O157 ベロ毒素プロモーター Qタンパク質

项目摘要

腸管出血性大腸菌O157感染症は、一頃のように大流行を見せることはなくなってきた。しかしながら、先進国において散発的に感染者が観察されており、その効果的な治療法の確立が待望されている。O157感染では溶血性尿毒症などの重篤な症状が小児において著しく、治療は困難をきわめている。溶血性尿毒症の原因はO157が産するベロ毒素が原因となっていると考えられており、その遺伝子はO157に溶原化するラムダ様ファージゲノム中に存在している。ベロ毒素遺伝子は2種類に大きく分類され、stx1,stx2と表記される。この二つの遺伝子のどちらを有するかにより、溶原ファージの種類が分けられ、それぞれVT1ファージ、VT2ファージと呼ばれる。先に私たちの研究グループではO157に内在するVT2ファージの全ゲノム構造を明らかにし、それが、基本的にラムダと同一であることを示した。本研究ではstx2遺伝子の発現機構を明らかにするために、stx2の上流にあるpR'プロモーターの同定を行った。方法としてはpR'プロモーターと思われる領域の下流にルシフェラーゼ遺伝子を連結したプラスミドを大腸菌BL21株に導入し、ルシフェラーゼの酵素活性を指標として、pR'プロモーターの絞り込みを行った。その結果、Q遺伝子の3'端180塩基では非常に高いルシフェラーゼ活性を確認することができたが、Q遺伝子の3'端180塩基にそのさらに下流320塩基を加えた配列をルシフェラーゼ遺伝子の上流につないだ場合には活性が低下した。このことはQ遺伝子の3'端180塩基にプロモーターが存在し、その下流320塩基にはターミネーターが存在することを意味する。

Intestinal haemorrhagic E. coli O157 infection is a pandemic. In the advanced countries, the spread of infected persons has been detected, and the establishment of effective treatment methods has been awaited. O157 infection, hemolytic uremia, severe symptoms, small symptoms, treatment difficulties The cause of hemolytic uremia is the cause of the toxin produced by O157, and this gene must be present in the human body that is lysogenized by O157. The toxin gene is classified into 2 species, stx1,stx 2 and the table is marked. These two types of proteins are divided into two groups: VT1 and VT2. The first part of the study is to show that the VT2 structure of the whole system is clear and basic. In this study, the discovery mechanism of stx2 gene was studied. Methods: The enzyme activity index of Escherichia coli BL21 strain introduced from the downstream of pR's culture medium was determined. As a result, the activity of the 3'-terminal 180 base of the Q gene was very high, and the activity of the 3'-terminal 180 base of the Q gene was very low. This means that the 3'-terminal 180-base of the Q gene exists, and the downstream 320-base exists.