RA滑膜マクロファージにおける変異型葉酸レセプターβの発現異常の解析

RA滑膜巨噬细胞突变型叶酸受体β异常表达分析

• 批准号: 12770232
• 负责人: 松下 紀子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770232/
• 关键词: 慢性関節リウマチ; マクロファージ; 葉酸レセプター

私達は慢性関節リウマチ(RA)滑膜マクロファージ系細胞に葉酸レセプター(FR)-βが過剰に発現し、高頻度に突然変異を起していることを見出した。突然変異のおこる原因やメカニズムについては不明な点が多いが、発作性夜間血色素尿症に見られる様な体細胞突然変異を予想している。今年度は以下の項目を目的として研究を行った。(1)この突然変異はRA滑膜マクロファージ系細胞に特有か。(2)新しい変異型FR-βの検索。(3)突然変異はクローナルなレベルで起こるのか。(4)変異型FR-β発現THP-1細胞株を樹立する。まず(1),(2)に関して、RA滑膜マクロファージ系細胞5例、変形性関節炎(OA)滑膜マクロファージ系細胞5例、LPSで刺激した健常人の末梢血単核球3例について、Pfu DNA polymeraseを用いたRT-PCR、塩基配列の決定を行った。その結果、RA、OA、LPSで刺激した健常人の末梢血単核球にそれぞれ4/55,2/25,1/29クローンに突然変異がみられた。このことから、FR-βに高頻度に起こる突然変異は炎症性マクロファージに特異的であることが示唆された。(3)について私達は、炎症部位に存在する細胞が活性酸素やNOを産生し、近位部の骨髄細胞の分裂時に作用してクローナルなレベルで体細胞突然変異がおこることを予想している。そこでRA炎症近位部の骨髄細胞を得、M-CSF/GM-CSF添加培地中にてミエロイドコロニーを形成後、Genomic DNAを得た。2組の蛍光標識プライマーを用いてNested PCR、SSCPを行い、exon3、4について検討した結果、72個中9個のミエロイドコロニーに変異がみられた。これらのコロニーについては現在検討中である。(4)に関しては、野生型FR-βを発現したTHP-1細胞株を5株樹立しており、同様に変異型FR-βを発現したTHP-1細胞株を樹立し、その機能を検討する予定である。

The expression of folate (FR)-β in the synovial membrane of chronic arthritis (RA) was detected with high frequency and sudden onset. Sudden changes in the body cells are caused by unknown factors, such as chronic nocturnal hemoglobinuria, and sudden changes in the body cells. This year, the following projects were carried out. (1)The sudden change in RA is unique to cells. (2)A new type of FR-β is detected. (3)All of a sudden, he changed his mind. (4)The mutant FR-β-producing THP-1 cell line was established. (1),(2), RA synovial cell line 5 cases, OA synovial cell line 5 cases, LPS stimulation of healthy human peripheral blood lymphocytes 3 cases, Pfu DNA polymerase RT-PCR, gene alignment determination. The results of RA, OA and LPS stimulation were 4/55, 2/25 and 1/29 respectively. The frequency of FR-β is very high. (3)In the presence of inflammation, the cells produce active acid and NO, and the proximal bone cells act during division. The bone marrow cells in the proximal part of RA inflammation were obtained, M-CSF/GM-CSF was added to the culture medium, and the Genomic DNA was obtained. 2 groups of light markers were used in Nested PCR, SSCP, exon3 and 4, and 9 of 72 were used in Nested PCR and SSCP. This is the first time I've ever seen you. (4)5 THP-1 cell lines were established and 5 wild type FR-β cells were identified.