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骨髄間質細胞由来の心筋細胞におけるカテコラミン、アセチルコリン受容体の発現解析

骨髓基质细胞心肌细胞儿茶酚胺和乙酰胆碱受体的表达分析

基本信息

批准号：
12770351
负责人：
伯野大彦
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

1.アセチルコリン受容体の発現解析CMG細胞におけるムスカリンM_1、M_2受容体の発現をRT-PCRにて解析した結果、M_1、M_2受容体ともに誘導後1週から発現し6週まで持続した。これは以前解析したβ_1、β_2受容体の発現様式と同様であり、心筋細胞としての表現形が完成した後に発現するものと考えられた。2.受容体の機能解析(1)α_1受容体誘導後1週の細胞をα_1刺激薬Phenylephrine(10^<-4>M)で48時間刺激し、細胞肥大の有無を観察した。Phenylephrine刺激によりcell area、perimeterはそれぞれ42%、25%と有意に増加した。したがって、α_1受容体はCMG細胞の肥大に関与することが示唆された。(2)β受容体誘導後4週の細胞の収縮能(収縮長、収縮率、収縮速度)をビデオ記録して解析した。β刺激薬Isoproterenol(10^<-7>M)刺激により、収縮能はそれぞれ38%、27%、51%と有意に増加した。この増加はPropranololおよびβ_1選択的遮断薬CGP20712Aの前投与によりほぼ完全に抑制された。したがって、以前解析した拍動数の変化と同様に、Isoproterenolの陽性変力作用は主にβ_1受容体を介することが示された。(3)ムスカリン受容体アセチルコリン受容体刺激薬Carbachol負荷後の細胞内IP_3含量をラジオイムノアッセイで解析した結果、Carbachol濃度依存的にIP_3含量の増加を認め、10^<-7>Mで約32倍となった。この増加はムスカリン受容体非選択的遮断薬AtropineおよびM_2受容体選択的遮断薬AFDX116の前投与でほぼ同程度に有意に抑制された。したがって、CMG細胞におけるムスカリン受容体はシグナル伝達機能を有し、主にM_2受容体を介することが示された。

1. Analysis of receptor development in CMG cells by RT-PCR. M_1 and M_2 receptors developed from 1 week to 6 weeks after induction. The expression of β_1 and β_2 receptors is similar to that of β_2 receptors. 2. 1. Cell proliferation was observed by α_1 stimulation with Phenylephrine(10^ M) at 1 week after α_1 receptor induction <-4>and 48 hours after α_1 receptor induction. Phenylephrine stimulation was intentionally increased by 42% and 25% in cell area and perimeter. The α_1 receptor is responsible for the hypertrophy of CMG cells. (2)The shrinkage ability (shrinkage length, shrinkage rate, shrinkage speed) of cells 4 weeks after β receptor induction was recorded and analyzed.β-Stimulus Isoproterenol(10^<-7>M) Stimulation and contraction energy were increased intentionally by 38%, 27%, and 51%. This increase in Propranolol and β_1-selective blocking agent CGP20712A is completely inhibited by the previous injection and β_1-selective blocking agent. The positive interaction of Isoproterenol with β_1 receptor was studied. (3)Analysis of intracellular IP_3 content after Carbachol loading showed that the increase of IP_3 content in Carbachol concentration-dependent manner was about <-7>32-fold. This increase in receptor non-selective interceptor Atropine and M_2 receptor selective interceptor AFDX116 is intentionally suppressed to the same extent as the previous one. The CMG cell receptor has the ability to express itself and the host M_2 receptor.