糖尿病での単球のアポトーシス抑制と動脈硬化の進行に関する分子生物学的解析

抑制糖尿病单核细胞凋亡和动脉硬化进展的分子生物学分析

• 批准号: 12770640
• 负责人: 藤田 延也
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770640/
• 关键词: 糖尿病; 動脈硬化症; 単球; アポトーシス; Protein kinase C; 転写調節因子; NF-кB; AP-1; NF-κB

単球性白血病由来のTHP-1培養細胞を用いて、高グルコース状態(HG;25.6mM glucose)と、osmotic controlとしてHGと同じ浸透圧に調節した正常グルコース状態(NG;5.6mM glucose)にてそれぞれ培養し、単球細胞のアポトーシスの状態を比較検討した。Flow cytometryでは、THP-1細胞の多くはアポトーシス状態にあったが、NG群に比較してHG群ではより多くの細胞がG_1/S期に存在した。クロマチンDNAの断片化をみると、NG群に比較してHG群でクロマチンDNAの断片化が減少していた。これらの結果から、HG状態ではTHP-1細胞のアポトーシスが抑制されviabilityが改善している可能性が示唆された。そこで次に、同細胞でのProtein kinase C(PKC)蛋白発現を検討すると、HG状態ではPKC isoform(α,β,γ,δ,τ and λ)のうちPKCβIIの発現が優位に亢進していた。また、単球における転写調節因子活性をGel shift assayで評価すると、nuclear factor(NF)-кBの転写活性はNG群とHG群の両群で亢進しているのに対して、activator protein(AP)-1の転写活性はHG群でのみ亢進していた。また、peroxisome-proliferator activated reseptor(PPAR)の転写活性もHG群でのみ亢進していた。次に、THP-1細胞のHG状態でのPKC-AP-1経路及びPPAR経路の活性化が、どのように細胞のviabilityの影響を与えるか、各種アポトーシス関連因子(Fas, Fas-ligand, Caspase family, Bcl-2 family, etc)の発現状態を検索したが、残念ながら有意な結果は得られなかった、そこで、cDNA chipを用いた解析を計画している。以上の結果から、高グルコース状態での培養単球細胞THP-1細胞では、PKC-AP-1経路とPPAR経路の亢進が生じて、アポトーシスが抑制されviabilityが改善している可能性が示唆された。

THP-1 cells were cultured with medium, high glucose status (HG; 25.6 mM glucose), osmotic control, HG, and the same osmotic pressure to regulate normal glucose status (NG; 5.6 mM glucose). Flow cytometry shows that THP-1 cells are in the G1/S phase. The fragmentation of DNA in HG group was reduced. These results indicate that HG status may improve the viability of THP-1 cells. Protein kinase C(PKC) protein expression in the same cell is investigated in the second and third order. PKC isoform(α,β,γ,δ,τ and λ) and PKCβII protein expression in the HG state are optimized. The activity of nuclear factor(NF)-κ B is in contrast to that of NG group and HG group, and the activity of activator protein(AP)-1 is in contrast to HG group. In addition, peroxisome-proliferator activated receptor (PPAR) is also active in the HG group. In addition, the activation of PKC-AP-1 and PPAR pathways in THP-1 cells, the effects of changes on cell viability, and the detection and analysis of the expression status of various factors (Fas, Fas-ligand, Caspase family, Bcl-2 family, etc.) were studied. The above results indicate that THP-1 cells in culture under high temperature condition may improve the viability of PKC-AP-1 pathway and PPAR pathway.