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単球/マクロファージにおけるオキシステロール生成の機序に関する研究

单核/巨噬细胞产生氧甾醇的机制研究

基本信息

批准号：
12770646
负责人：
加藤博史
金额：
$ 1.22万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでのマウス由来マクロファージクローンを用いた検討では、細胞膜表面に持続的にoxysterolを発現するクローンと全く発現しないクローンとが見出されたが、それらのクローンにおけるoxysterol発現量を調節する因子は未だ見つかっていない。そこで今年度は、これらのクローンについて、細胞表面抗原の発現、サイトカイン産生能をインターフェロン-γ(IFN-γ)あるいはリポポリサッカライド(LPS)による刺激の前後について詳細に検討し、oxysterolの発現と相関する因子を探索した。細胞表面抗原はクラスII抗原(H-2^d)、Mac-1、CD40、B7-1/-2等についてFITC標識抗体を用いたFACS解析を行った。サイトカインはIFN-γ、LPS刺激前後のマクロファージ培養上清中IL-1、IL-6、IL-12、TNF、GM-CSF,をELISA法を用いて測定した。クラスII抗原の発現量はクローン間で大きく異なり、IFN-γによって発現が誘導されるものとそうでないものが見いだされた。しかし、クラスII抗原の発現量とoxysterol発現量の間に相関はみられなかった。Mac-1、CD40、B7-1/-2はすべてのクローンで検出され、クローン間に発現量の差はみられたがoxysterol発現量との間で相関するものはなかった。サイトカインはすべてについて無刺激のマクロファージクローンの培養上清には検出されず、1L-1、IL-6、TNF、GM-CSFはLPS刺激によってすべてのクローンで産生が確認されたが特にGM-CSFにおいて産生量がクローン間で大きく異なった、IFN-γによる前処理はLPS刺激後のサイトカイン産生を増加させた。IL-12はLPS単独の刺激で産生するもの、IFN-γとLPSで刺激することで初めて産生するもの、IFN-γとLPSでの刺激後も産生しないもの、の3種類に分かれた。しかしこれらのサイトカイン産生のパターンとoxysterol発現量の間に相関はみられなかった。以上の結果から、マクロファージにおけるoxysterolの発現は細胞表面抗原の発現あるいはサィトカイン産生の調節とは独立した機構で調節されていることが示唆された。

The factors that regulate the amount of oxysterol produced by the presence of oxysterol on the surface of the cell membrane are not found in the study. This year, we explored factors related to cell surface antigen development, protein production, IFN-γ(IFN-γ) and LPS (LPS) stimulation. FACS analysis of FITC labeled antibodies against cell surface antigens such as H2d, Mac-1, CD40, B7-1/-2, etc. IL-1, IL-6, IL-12, TNF and GM-CSF were detected by ELISA in culture supernatant before and after LPS stimulation. The amount of IFN-γ produced by the expression of CRII antigen varies greatly from time to time, and the expression of CRII antigen varies greatly from time to time. There is a correlation between the amount of II antigen and the amount of sterol. Mac-1, CD40, B7-1/-2: The difference between the amount of oxysterol emitted and the amount of oxysterol emitted is related to the amount of oxysterol emitted. The production of IL-1, IL-6, TNF and GM-CSF in the culture supernatant of LPS stimulated by IFN-γ was confirmed, and the production of IFN-γ in the culture supernatant of LPS stimulated by IFN-γ increased. IL-12 is produced in response to LPS alone, IFN-γ in response to LPS alone. The amount of oxysterol produced during the reaction is related to the amount of oxysterol produced. The above results show that the production of oxysterol is regulated by independent mechanisms.