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VEGF、アンジオポエチンによる移植膵ラ島の血管新生modulation

VEGF 和血管生成素对移植胰岛的血管生成调节

基本信息

批准号：
12770649
负责人：
山内淳一郎
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

[背景]膵島移植には移植効率の悪さ、インスリン離脱率の低さなどの問題がある。移植を妨げる要因として、拒絶反応、移植直後の虚血、低酸素状態、アポトーシスとネクローシスの誘導が挙げられ、移植ラ島の生着率を向上するためには拒絶反応の抑制、および移植早期からの血管新生が必要である。近年、移植ラ島の血管新生に対するVEGF- Flt1- Flk1の関与が明らかになってきた。[目的]移植ラ島に血管新生因子(VEGF、アンジオポエチン)を遺伝子導入し、血管新生を促進することにより生着率の向上と血糖改善を目指す。[方法]1)6-8w相当のlCRmiceおよび200-250gのSDratsより静置法にてラ島分離する。2)分離ラ島のviabilityの測定をトリバンプルーとインスリン産生量の測定をELISAで行う。3)Adenovirus vector(以後Adv)でGFP遺伝子をラ島に導入し、発現の程度を蛍光顕微鏡で観察する。Adv感染ラ島のviabilityをインスリン産生量で測定する。4)分離ラ島にAdvを用いてVEGF、アンジオポエチンの遺伝子を導入する。5)Skinfold chamberにラ島を移植し、血管新生の解析を行う。[結果]1)150-200個/mouse、200-300個/ratのラ島が分離し、トリバンブルーでViabilityをみた。分離後48hで90%以上の生存をみたが120hで80%以上が死滅した。2)2.8mMグルコース下での分離ラ島のインスリン産生量はAdv感染群で5.40pg/h/islet、非感染群で5.77pg/h/isletと差が見られなかった。3)Advを用いてGFP遺伝子を導入し蛍光顕微鏡でその発現を30MOlまで確認した。4)Skinfold chamberに移植後6日目に新生血管が、14日目に血管網が形成された。VEGF導入ラ島では血管新生の形成がコントロールに比較し早期より認められた。[まとめ]分離ラ島にex vivoでAdvを用いて遺伝子導入することが可能であった。Adv遺伝子導入による、ラ島のviabilityrへの影響は認められなかった。Adv vectorでVEGF遺伝子を導入し、ラ島のviabilityを損なわず導入し、早期の生者を誘導できる可能性が示唆された。

[Background] Bojima transplantation has a problem with transplantation efficiency and low detachment rate. The main reasons for transplantation failure, rejection of reaction, blood deficiency immediately after transplantation, hypoacidemia, and induction of anaesthesiaげられ, transplantation rate of ラshima is higher, rejection of reaction is suppressed, angiogenesis is necessary in early stage of transplantation. In recent years, the transplantation of angiogenesis and VEGF- Flt1- Flk1 in Rashima has been carried out. [Purpose] The purpose of transplantation is to introduce the VEGF (Anti-Glass) angiogenesis factor (VEGF), promote the angiogenesis, and improve the blood sugar level. [Method] 1) 6-8w equivalent のlCRmice および 200-250g のSDrats よりstatic method にてラshima separation する. 2) Measurement of the viability of the separation island and the amount of production of the separation tube were measured by ELISA. 3) The Adenovirus vector (hereinafter Adv) was introduced into the GFP gene and the degree of detection was measured using a microscopic microscope. The viability of Adv-infected Rashima was measured. 4) Separate Rashima's Advを using いてVEGF and アンジオポエチンの缝子を imported する. 5)Skinfold chamber transplantation and analysis of angiogenesis. [Results] 1) 150-200 pieces/mouse, 200-300 pieces/ratのラ岛がseparationし, トリバンブルーでViabilityをみた. 48h after separation, more than 90% of the animals will survive and 120h will recover and more than 80% of them will die. 2) 2.8mM グルコース下でのisolation island のインスリン production amount はAdv infection group で 5.40 pg/h/islet, non-infected group で5.77pg/h/islet と difference が见られなかった. 3) The Adv was confirmed by using a 30MOl microscope and using a GFP-containing microscope. 4) In the Skinfold chamber, new blood vessels are formed on the 6th day after transplantation, and the vascular network is formed on the 14th day. The introduction of VEGF into Rashima has led to the formation of new blood vessels and the early stage of angiogenesis. [まとめ] Separate ラshima にex vivoでAdvを Use いて缝子 to import することがpossible であった. Adv's legacy is introduced by による、ラ岛のviabilityrへのeffectはcognitionめられなかった. Adv vectorでVEGF legacyそ子をductionし,ラ岛のviabilityをdamageなわず introductionし, early living personをinducedできるpossibilityがshows instigationされた.