Ablation耐性MCF-7細胞に認められる細胞内高エストラジオールの機序

抗消融 MCF-7 细胞中观察到的细胞内高雌二醇机制

• 批准号: 12770662
• 负责人: 戸倉 英之
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770662/
• 关键词: estradiol; aromatase; 17beta-HSD; real time RT-PCR; アロマターゼ; サルファターゼ; アロマターゼインヒビター; サルファターゼインヒビター; 17β-HSD; エストラジオール

1.細胞・組織内estradiol濃度に影響を与える腫瘍内酵素であるaromatase,17beta-HSD(type1,2,4,7,8)を特異的に認識するPCR Primerを作成し、タンパクレベルでは、酵素活性を測定、m-RNAレベルでは、real time RT-PCRにて定量を行っている。測定に関しては、過去の手術時に冷凍保存されている閉経後の乳癌患者組織約50検体を使用している。2.Ablation耐性MCF-7においては、当初親株に比べ約10倍高濃度の細胞内estradiolが認められたが、その後の追加実験では再現性に乏しく(2〜5倍)、また別のablation耐性クローンでは、親株との間に細胞内estradiol濃度の明らかな相違が認められず、現在追試実験を行っている。一方、ablation耐性MCF-7をaromatase inhibitorで処理しても、細胞内estradiol濃度、細胞増殖に影響は認められなかった。また、sulfatase inhibitorを用いると細胞増殖を抑制したが、この際、細胞内estradiolが著しく高濃度になっていたこと、親株では増殖が亢進したこと、sulfatase inhibitorの構造が、estrogenに類似していることから、高濃度のsulfatase inhibitorが、estradiolに分解されることで、細胞に高濃度のestradiol(10-6M)を添加した際と類似の機序で細胞増殖抑制をしたものと考えられ,ablation耐性MCF-7におけるsulfataseの役割は確認できなかった。3.細胞内estradiol濃度が一定しないため、放射能標識した前駆物質を用いてのtracer実験および取り込み実験は、現在見合わせている。

1. The effect of estradiol concentration in cells and tissues on the enzyme activity in tumors is specifically recognized by PCR Primer generation, enzyme activity measurement, m-RNA detection, and real-time RT-PCR quantification. About 50 samples of breast cancer patient tissues were used after surgery. 2. Ablation tolerance MCF-7 was found to have a high concentration of intracellular estradiol about 10-fold higher than that of the parent strain at the beginning, and the reproducibility was lacking (2 - 5 fold) after the addition of the inhibitor. The ablation tolerance of MCF-7 was found to be different from that of the parent strain. One side, ablation tolerance MCF-7 aromatase inhibitor treatment, intracellular estrol concentration, cell proliferation effects In addition, sulfatase inhibitor is used to inhibit cell proliferation. In this case, high concentrations of estradiol are present in cells. In parent plants, proliferation is stimulated. The structure of sulfatase inhibitor is similar to that of estrogen. High concentrations of sulfatase inhibitor are present in cells. Cell proliferation inhibition was detected when high concentrations of estradiol(10-6M) were added to the cells and similar mechanisms were observed, and sulfatase activity was confirmed when MCF-7 was ablated. 3. Intracellular estrol concentrations are constant, and radioactive markers are used to trace substances.