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樹状細胞を用いた膵癌に対する免疫療法の確立

利用树突状细胞建立胰腺癌免疫疗法

基本信息

批准号：
12770678
负责人：
島村弘宗
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

樹状細胞を用いた免疫療法を行う場合、腫瘍抗原を提示させる方法が問題となる。膵癌では腫瘍関連抗原が同定されていないため、膵癌細胞そのものを腫瘍抗原の供給源として樹状細胞に取り込ませる方法が考えられる。本研究では放射線照射を行った膵癌細胞が樹状細胞に貪食されるか否かについて検討した。培養膵癌細胞株Panc1、MiaPaCa-2、PK-1を用いて25.35Gyの電子線を照射した後、Annexin VおよびPropidium Iod ideを用いて染色し、フローサイトメトリにて解析したところ、照射後3時間の時点でいずれの細胞株においてもアポトーシスとネクローシスの両方が検出された。腫瘍細胞の種類によってアポトーシスをおこしやすいものと、むしろネクローシスに陥りやすいものとがあった。照射線量が大きいほどネクローシスになりやすかった。次に膜に固定される蛍光色素(オレンジ色)にて染色したPanc1またはMiaPaCa-2に30Gyの照射を行った後、予め末梢血単球よりGM-CSF、IL-4を用いて誘導、培養しておいた未成熟樹状細胞(緑色の蛍光色素にて染色したもの)を加えて共培養し、18時間後に蛍光顕微鏡で観察したところ、腫瘍断片(オレンジ色)が樹状細胞(緑色)に取り込まれている様子が確認された。同様に蛍光色素(オレンジ色)にて染色したMiaPaCa-2に30Gyの照射を行った後、未成熟樹状細胞を加えて18時間共培養した後、FITC標識抗CD1a抗体、および抗HLA-DR抗体にて染色し、フローサイトメトリにて解析したところ、いずれの抗体を用いた場合でもダブルポジティブ細胞(腫瘍片を貪食した樹状細胞)が多数認められた。以上より末梢血単球よりGM-CSF、IL-4を用いて誘導、培養した未成熟樹状細胞は、放射線照射を実施した膵癌細胞を貪食することが確認された。

Dendritic cells are used in immunotherapy. The method for identifying tumor-associated antigens from cancer cells and tumor antigen suppliers and dendritic cells was studied. In this study, we investigated whether radiation exposure caused cancer cells to become hyperphagous or not. After irradiation with 25.35Gy electron beam, Annexin V and Propidium iodide were used to stain and analyze the tumor cell lines Panc1, MiaPaCa-2 and PK-1. Three time points after irradiation, the tumor cell lines were detected. The number of people in the world who are interested in this kind of thing is very high. The amount of radiation exposure is large, and the number of people exposed to radiation is large. Immature dendritic cells were induced and cultured with GM-CSF and IL-4 after 30Gy irradiation with Panc1 and MiaPaCa-2 (Green pigment staining) was added to the co-culture. After 18 hours, the cells were examined by light microscopy. The tumor fragments (green) were detected by light microscopy. After 30Gy irradiation with MiaPaCa-2, immature dendritic cells were co-cultured for 18 hours, FITC labeled anti-CD1a antibody and anti-HLA-DR antibody were stained with the same photochrome, and most of the immature dendritic cells were identified when the anti-CD1a antibody was used. The above results were confirmed by induction, culture and irradiation of immature dendritic cells with GM-CSF and IL-4.