精子先体蛋白SP-10が精子・卵結合に果たす役割の生化学的・分子生物学的検討

精子顶体蛋白SP-10在精卵结合中作用的生化和分子生物学研究

• 批准号: 12770930
• 负责人: 浜谷 敏生
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770930/
• 关键词: 精子膜蛋白; SP-10; 先体反応; 精子・卵結合; インテグリンβ1; 受精

精子先体膜蛋白SP-10はヒトでは主に先体外膜内側および先体内膜外側に特異的に発現する。ヒト精子は卵透明帯に接すると先体膜に露出した接着分子が卵透明帯または卵細胞膜間の結合に寄与するとされる。ヒト受精過程におけるSP-10の生理学的役割を検討した。ヒトSP-10を抗原としてモノクロナール抗体mAb pep-SP10を作製した。1.ヒト精子のSP-10の局在を明らかにするためmAb pep-SP10を用いた免疫蛍光染色を行い先体反応誘起後SP-10は赤道部に認められた。2.SP-10の精子・卵透明帯結合での役割をhuman hemi zona assayを用い検討した。mAb pep-SP10を先体反応誘起後のヒト精子に添加することによりヒト卵透明帯への接着・侵入平均精子数は変化しなかった。3.SP-10の精子・卵細胞膜結合での役割をハムスター未受精卵ヒト精子侵入試験を用い検討した。mAb pep-SP10を先体反応誘起後のヒト精子に添加することにより精子侵入率およびハムスター卵1個当たりの接着・侵入精子数は濃度依存性に減少した。4.精子・培養細胞接着試験を用いて、近年精子・卵細胞膜結合において注目されているインテグリンβ1とSP-10が結合しうるか否かを検討した。mAb pep-SP10を先体反応誘起後のヒト精子に添加することにより、インテグリンβ1を発現するF9細胞とインテグリンβ1を欠失したTKO細胞への精子接着は抑制された。TKO細胞への精子接着はF9細胞への精子接着に比して少ない傾向が認められた。以上のことから、ヒトSP-10が精子・卵結合に関与すること、マウス卵細胞膜上の精子受容体として注目されるインテグリンβ1がヒトにおいても重要であること、SP-10はインテグリンβ1と結合しないことが示唆された。

The sperm precursor membrane protein SP-10 ヒトで ヒトで に mainly に shows a specific に occurrence する before the inner side of the extracorporeal membrane および before the outer side of the extracorporeal membrane に. ヒ ト は sperm egg transparent 帯 に meet す る と body membrane に first show し た then molecular が eggs transparent 帯 ま た は egg membrane between の に send with す る と さ れ る. Youdaoplaceholder0 fertilization process におけるSP-10 <s:1> physiological division を検 discussion た. Youdaoplaceholder0 SP-10を antigen と <s:1> てモノ ロナ ロナ ロナ <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> を antibody mAb pep-SP10を is used to prepare た. 1. ヒ ト sperm の SP - 10 の bureau in を Ming ら か に す る た め mAb pep - SP10 を with い た immune dyeing line を い 蛍 light body first against 応 induced after SP - 10 は equatorial に recognize め ら れ た. 2.SP-10 <s:1> sperm-oocyte zona pellucida binding で <s:1> concurettage をhuman hemi zona assayを use 検 検 to collect た た. MAb pep - SP10 を body first against 応 induced after の ヒ ト sperm に add す る こ と に よ り ヒ ト eggs transparent 帯 へ の average sperm count, then invade the は variations change し な か っ た. 3.SP-10 <s:1> sperm-oocyte membrane binding で <s:1> convolution をハムスタ をハムスタ unfertilized egg ヒト sperm invasion test を use 検 検 to extract た た. MAb pep - SP10 を body first against 応 induced after の ヒ ト sperm に add す る こ と に よ り sperm into お よ び ハ ム ス タ ー eggs 1 when た り の, then invade the sperm count は concentration dependence に reduce し た. 4., sperm culture cell, then test を with い て, sperm, the egg membrane in recent years, combining に お い て attention さ れ て い る イ ン テ グ リ ン beta 1 と SP - 10 が combining し う る か no か を beg し 検 た. MAb pep - SP10 を body first against 応 induced after の ヒ ト sperm に add す る こ と に よ り, イ ン テ グ リ ン beta 1 を 発 now す る F9 cells と イ ン テ グ リ ン beta 1 を owe lost し た TKO cells へ の then は inhibit sperm さ れ た. TKO cells へ <s:1> sperm, followed by へ F9 cells へ sperm, followed by に, which is less な than <s:1> て, and が tend to が recognize められた. Above の こ と か ら, ヒ ト SP - 10 が sperm, egg に masato and す る こ と, マ ウ ス egg membrane の sperm by let body と し て attention さ れ る イ ン テ グ リ ン beta 1 が ヒ ト に お い て も important で あ る こ と, SP - 10 は イ ン テ グ リ ン beta 1 と combining し な い こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

浜谷敏生 他: "排卵誘発法"産婦人科治療. 80. 1137-1145 (2000)

Toshio Hamaya等：《妇产科治疗促排卵法》80。1137-1145（2000）。

浜谷敏生 他: "不妊治療の動向〜ART(assisted reproductive thecnology)はどこまで進歩するのか?"周産期医学. 31(1)(印刷中). (2000)

Toshio Hamatani 等人：“不孕症治疗的趋势 - ART（辅助生殖技术）进展如何？”31(1)（出版中）。

Hamatani T, et al.: "Amonoclonal antibody to human SP-10 Inhibits In vitro the binding of human sperm to hamster oolemma but not to human Zona pellucida."Bio Reprod. 62(5). 1201-1208 (2000)

Hamatani T 等人：“人 SP-10 的单克隆抗体在体外抑制人精子与仓鼠卵膜的结合，但不抑制与人透明带的结合。”Bio Reprod。

Hamatani T, et al.: "Epigenetic mark sequence of the H19 gene In human sperm."Biochim biophys Acta. (In press). (2001)

Hamatani T 等人：“人类精子中 H19 基因的表观遗传标记序列。”Biochim Biophys Acta。