Elucidation of the pathogenesis of implantation failure for novel treatment development focusing on extracellular secretory granules derived from preimplantation embryos and uterine endometrium

阐明植入失败的发病机制，开发新的治疗方法，重点关注来自植入前胚胎和子宫内膜的细胞外分泌颗粒

• 批准号: 21H03078
• 负责人: 浜谷 敏生
• 金额: $ 10.98万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H03078/
• 关键词: 生殖医学; エクソソーム; miRNA; 胚盤胞; 培養液; 子宮内膜; 細菌叢; 培養後培養液

計画概要の1. 　 マーモセットの雌性生殖器内の細菌叢とエクソソームの解析マーモセットの採卵（開腹手術）の際に、無菌的に左右卵管、子宮体部、子宮頸管をそれぞれ穿刺し、少量の培養液を注入後すぐに吸引して内腔の洗浄液を回収した。遠心後沈渣は細菌叢の解析に供し、上清は(マイクロ)エクソソームの解析に供した。DNA抽出後全ゲノム増幅を試みたが、予備実験として行った5体のサンプルのうち、1個体からはDNAが増幅されず、4個体から十分なDNA量が増幅され、NGSを用いた16S rRNA遺伝子シークエンスに供した。その結果、細菌を検出することができたのは2個体についてのみであった。そこで、マーモセット子宮内の着床前期胚を膣から上行性に回収する操作の際に得られる子宮内膜組織片をサンプルとしたところ、21検体全てから16S rRNA遺伝子細菌叢の結果が得られた。現在はそれらの結果のデータ解析中である。計画概要の4. および5. ヒト胚盤胞培養に使用した後の培養液のEMV解析とART臨床データの解析顕微授精後に1個の受精卵を30-ul dropに入れ、培養液を交換せず培養して形態良好胚盤胞が得られた場合に、使用済み培養液を回収し、胚それぞれについて凍結保存した（~25 ul）。その後移植され妊娠に至った胚が由来する培養液群（妊娠群）、妊娠に至らなかった胚の由来する培養液（非妊娠群）、胚を入れないコントロール培養液についてmiRNA網羅的解析を行い、各群に特異的なmiRNAを抽出した。さらに、サンプルをプールしないで、それぞれの胚の培養液(~25ul)中の miRNA発現量についてリアルタイムqPCRを用いて解析した。その結果、培養液中の5つのmiRNAの発現量に注目することで、その胚を胚移植した場合に妊娠する可能性を予測できることが明らかとなった (Kamijo S, Hamatani T, et al. Reprod Biol Endocrinol. 2022)。

Project Summary 1. Analysis of bacterial flora in female genitals during oocyte harvesting (laparotomy), sterile oocyte tubes, uterine body, cervical canal are punctured, a small amount of culture solution is injected, and the washing solution in the lumen is sucked back. The analysis of bacterial flora in telecentric sediment and supernatant is carried out. After DNA extraction, all DNA samples were amplified, prepared, stored, stored, The result is that the bacteria can be detected in two different ways. The results showed that the endometrial tissue sections obtained during the preimplantation period in the uterus were completely isolated from the 16S rRNA gene flora. Now the result is in the analysis. Project Summary 4.および5. EMV analysis and ART clinical analysis of culture medium after use of blastocyst culture; 30-ul drop of 1 fertilized egg after microinsemination; culture medium exchange; recovery of blastocyst with good morphology; freezing and preservation of embryos (~25 ul) MiRNA analysis was performed in culture medium from pregnancy to embryo origin (pregnant group), culture medium from pregnancy to embryo origin (non-pregnant group), and culture medium from embryo entry, and miRNA specific to each group was extracted. In addition, miRNA production in embryo culture medium (~25ul) was analyzed by qPCR. The results showed that miRNA expression in culture medium was significantly higher than that in embryo transfer (Kamijo S, Hamatani T, et al. Reprod Biol Endocrinol. 2022)。

项目成果

生殖補助医療(ART)の実際．

辅助生殖技术（ART）的现实。

• 发表时间: 2023
• 期刊: 臨床検査
• 作者: 浜谷敏生，宇津野宏樹;木村寛子，宮崎康太郎，福岡美桜，田中守．
• 通讯作者: 木村寛子，宮崎康太郎，福岡美桜，田中守．

胚培養液の miRNA 発現プロファイルを用いた良好胚予測モデルの作成

利用胚胎培养液的 miRNA 表达谱创建良好的胚胎预测模型

• 发表时间: 2021
• 作者: 上條慎太郎;浜谷敏生;山田満稔;小田原靖;田中守;青木大輔
• 通讯作者: 青木大輔

特集 最新知識の理解に役立つ 産婦人科医療の変遷と展望 生殖医療 1.ARTにおける調節卵巣刺激法

专题 有助于了解最新知识 妇产科医学的变化与展望 生殖医学 1. ART中的控制性卵巢刺激法

• DOI: 10.18888/sp.0000001871
• 发表时间: 2021
• 期刊: 産婦人科の実際
• 作者: Abe Chikara;Katayama Chikako;Bazek Murat;Nakamura Yasuna;Ohbayashi Kento;Horii Kazuhiro;Fujimoto Chisato;Tanida Mamoru;Iwasaki Yusaku;Inoue Tsuyoshi;Nin Fumiaki;Morita Hironobu;浜谷敏生
• 通讯作者: 浜谷敏生

ランションセミナー「～ART保険適応化とガイドライン策定に向けて～ EBMに基づいた卵巣刺激法の考察」

兰生研讨会“~ART保险覆盖范围与指南制定~基于EBM的卵巢刺激方法的思考”

• 发表时间: 2021
• 作者: Yoshimatsu Yuki;Noguchi Rei;Sin Yooksil;Tsuchiya Ryuto;Ono Takuya;Sei Akane;Sugaya Jun;Iwata Shintaro;Yoshida Akihiko;Kawai Akira;Kondo Tadashi;浜谷敏生
• 通讯作者: 浜谷敏生

【受精と発生をめぐる話題】 着床前期胚発生における遺伝子発現調節機構

[受精发育相关专题] 着床前胚胎发育过程中的基因表达调控机制

• 发表时间: 2022
• 期刊: HORMONE FRONTIER IN GYNECOLOGY
• 作者: Ikeda Yoshiki;Yoshihara Masato;Tamauchi Satoshi;Yokoi Akira;Yoshikawa Nobuhisa;Kajiyama Hiroaki;浜谷敏生
• 通讯作者: 浜谷敏生