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RECQヘリカーゼファミリーのゲノム安定化機構における役割

RECQ解旋酶家族在基因组稳定机制中的作用

基本信息

批准号：
14654151
负责人：
草野好司
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyushu Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はRECQファミリー蛋白が染色体をどのように安定維持しているかを知るために、大腸菌RecQと出芽酵母、ショウジョウバエ(Dm)のRECQ相同蛋白の遺伝学的・生化学的解析を行った。(1)大腸菌RecQがMutSLHによるDNAミスマッチ修復経路で機能することを発見した。(2)出芽酵母のSGS1(RecQ相同蛋白)が2本鎖DNA切断修復に関与していることを証明した。(3)ショウジョウバエdmblm/mus309変異は、(a)減数分裂組換え頻度の低下、(b)雌不妊性のmeiW68変異導入による回復、(c)2本鎖切断点において、交叉あり遺伝子変換と近傍欠失の上昇が起こることを発見した。これらの研究成果よりBLM蛋白が2本鎖切断修復と減数分裂期組換えに関与することが分かった。dmrecQ4^<P104>変異は、(a)2齢幼虫期に致死を引き起こした。(b)この変異株内でdmrecQ4導入遺伝子P{hs70p-dmrecQ4}を幼虫期に発現させると、発生は正常に進み成虫に達した。(c)弱く発現させると25%の個体のみが成虫に達したが、眼の退縮と肢の彎曲といった発生異常が認められた。、(d)dmrecQ4^<P104>/P{hs70p-dmrecQ4}株の雌は、完全不妊性を示した。dmrecQ5^<del>変異は、dmrecQ4^<P104>変異株のような致死性を示さず、dmblm/mus309変異のように、MMSに対する著しい感受性のみを示した(4)DNAヘリカーゼ活性の測定:ショウジョウバエDmRecQ4蛋白とDmKu70蛋白をMBP融合蛋白として、アミロースカラム、DNAセルロースカラムの2段階を通して、精製した。FRET(蛍光共鳴エネルギー転移)の原理を利用して、donor/receptorであるFITC/Cy3を基質DNAの末端に標識させ、励起光を当てると、2本鎖状態ではdonorの蛍光はrqceptorによって吸収されるが、ヘリカーゼによってreceptor-相補鎖が巻き戻されると、donorは蛍光を発する系を作製した。実際に大腸菌UvrDヘリカーゼがFITC-単鎖からCy3-相補鎖を巻き戻すことを確認した。この系を用いて、DmrecQ4蛋白が平滑末端のDNA基質を巻き戻すことが分かった。

We have conducted the genetic and biochemical analysis of the same protein in Escherichia coli, budding yeast, and yeast (Dm). (1)The function of E. coli RecQ in the DNA repair pathway of MutSLH was discovered. (2)SGS 1 (RecQ-like protein) of budding yeast was proved to be related to DNA cleavage and repair in 2 locks. (3)(a) The frequency of meiotic transformation is low;(b) The frequency of meiotic transformation is low;(c) The frequency of meiotic transformation is high;(d) The frequency of meiotic transformation is low;(c) The frequency of meiotic transformation is high;(d) The frequency of meiotic transformation is low;(e) The frequency of meiotic transformation is low;(f) The frequency of meiotic transformation is low;(e) The frequency of meiotic transformation is low;(e) The frequency of meiotic transformation is low;(e) The frequency of meiotic transformation is low;(f) The frequency of meiotic transformation is low;(e) The frequency of meiotic transformation is low;(e) The frequency of meiotic transformation is low;(f) The frequency of meiotic transformation is low;(e) The frequency of meiotic transformation is low;(e) The frequency of meiotic transformation is low;(f) The frequency of meiotic transformation is low;(e) The frequency of meiotic transformation is low;(e) The frequency of meiotic transformation is low;(e) The frequency of meiotic transformation is The results of this research show that BLM protein is related to meiotic transformation and repair. dmrecQ4 ^different,(a) 2 larval lethal lead<P104>(b)In these plants, the dmrecQ4 introduced gene P {hs70p-dmrecQ4} was developed during larval stage, and developed into normal adult stage. (c)25% of individuals are weak, their eyes are retracted, their limbs are bent, and they are abnormal. (d) The female and complete sterility of dmrecQ4 ^/P {hs70p-dmrecQ4} strain was demonstrated.<P104>DmrecQ5, dmrecQ4, DmrecQ5, DmrecQ5, Dmrec<del><P104>The principle of FRET (fluorescence resonance) is used to control the donor/receptor interaction between FITC/Cy3 and the terminal marker of matrix DNA, excitation light, and 2 intrinsic lock state. In the meantime, Escherichia coli UvrD was identified as a FITC-linked virus. The DNA matrix of the smooth end of the DmrecQ4 protein is divided into two parts.