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ネガティブイメージによる分裂準備帯微小管形成中心の構造解析の試み

尝试利用负像分析分割准备区微管形成中心的结构

基本信息

批准号：
15657017
负责人：
峰雪芳宣
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

動物細胞の微小管は中心体を核にして放射状に形成されるのに対し、植物では1点に集中した微小管形成中心(MTOC)が存在しない。しかし、植物の微小管構築で、中心体に代わるどのような構造が植物のMTOCとして働いているのか、多くの電子顕微鏡や顕微鏡での解析にもかかわらず、未解決のままである。蛍光抗体を使った研究から、動物同様植物でもγチューブリンが植物のMTOCと思われる領域に幅広く存在することは知られているが、これらが本当に微小管のマイナス端に存在するのかどうかも不明であった。昨年度、我々は加圧凍結法で瞬時に凍結したタマネギ表皮細胞を2軸電子線トモグラフィー法で観察することで、微小管端の形状とその存在様式を検出することを可能にし、まず間期細胞の表層微小管について、マイナス端と思える部分の構造を調べ、動物の中心体で見られるのと似た、γチューブリン複合体と思える構造でcapされた微小管は、細胞表層に単独で存在するものと、他の微小管のそばに存在するものがあることを見つけた。今年度は、これを定量的に解析し、後者の微小管のそばから新しい微小管が枝分かれする時のMTOCの一部と考えられるものが、約半数のcap端でみられることが分かった。しかし、分裂準備帯では、間期でみられるようなcap端は観察できず、ほとんどの微小管端の口は開いていた。これは、間期と分裂準備期で微小管ダイナミックスの状態が異なっていることを示唆する。細胞内のリボゾームをマッピングし、微小管端周辺にリボゾーム排除域があるかどうか判定するネガティブイメージによる微小管端近傍の解析を行った結果、口の開いた微小管端で、微小管端の周りにリボゾーム排除域の存在が示唆されるものもあったが、cap端では明確なリボゾーム排除域は認識できないことが分かった。

In animals, microtubule centrosome is formed radially, while in plants, microtubule formation center (MTOC) is concentrated at one point. The structure of microtubule of plant, the generation of centrosome, the structure of MTOC of plant, the analysis of electron microscope and microscope, the unresolved problem. The light antibody is used to study the existence of small tubes in plants, animals and plants In the past year, we have applied the pressure freezing method to instantly freeze the epidermal cells. The two-axis electron line method has been used to observe the shape and existence of the microtube ends. It is possible to adjust the structure of the microtube ends in the surface layer of the interphase cells. The centrosome of the animals has been observed to be similar to the microtube caps. The surface layer of the cell exists independently, and other microscopic tubes exist independently. This year, the analysis of quantitative analysis, the latter of the micro-tube, the new micro-tube branch, when the MTOC part of the examination, about half of the cap end, the analysis of quantitative analysis, the latter of the micro-tube branch, when the MTOC part of the examination, about half of the cap end, about the analysis of quantitative analysis, the latter of the micro-tube branch, when the MTOC part of the examination, about half of the cap end, the analysis of quantitative analysis, the analysis of quantitative analysis of quantitative analysis, about half of quantitative analysis, about half of quantitative analysis, when the MTOC part of quantitative analysis, about half of quantitative analysis, about half of The gap between the two ends of the tube is open, and the gap between the two ends is open. The state of the microtubule varies between the interphase and the mitotic preparation period. The results of the analysis of the vicinity of the micro-tube end, the micro-tube end, the micro-tube end and the micro-tube end in the cell are as follows: