PPBに局在するcdc2ホモログのリン酸化状態の経時変化の検出

检测 PPB 中 CDC2 同源物磷酸化状态的时间依赖性变化

• 批准号: 08640848
• 负责人: 峰雪 芳宣
• 金额: --
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08640848/
• 关键词: 微小管; cdc2; cdk; リン酸化抗体; Preprophase Band; タマネギ; 根立分裂組織

高等植物では、分裂前期になると微小管が束化して分裂準備帯(preprophase band ; PPB)が形成される。この分裂準備帯が細胞周期における分裂の位置決定に重要な意味をもつと考えられている。現在までに、細胞周期進行を制御するprotein kinaseであるp34^<cdc2>homologが分裂準備帯に局在し、分裂準備帯の形成・崩壊過程のいくつかの段階に関与している可能性が示されている。p34^<cdc2>の活性化は、自己の14, 15位のアミノ酸残基T-14, Y-15のリン酸化-脱リン酸化によって制御されていると考えられているので、本研究では分裂準備帯に局在するp34^<cdc2> homologのリン酸化状態を調べることにした。T-14, Y-15を含むp34^<cdc2>の保存領域(GEGTYGVVYK)のペプチドを合成し、これを抗原として抗体を作製した。この抗体でタマネギ根端分裂細胞を染色したところ、分裂前期のほとんどすべての細胞で分裂準備微小管帯が形成され、p34^<cdc2> homologが分裂準備帯に局在しているにもかかわらず、この抗体では同時期の細胞で分裂準備帯を約45%しか認識できなかった。T-14, Y-15のリン酸化状態を変えた4種類のペプチド(前述)と抗体をそれぞれ反応させた後のウェスタンブロットおよび分裂準備帯の染色の結果、この抗体は、T-14がリン酸化し、Y-15が脱リン酸化した状態以外の3種類のリン酸化状態に対して高い結合性を示すことが分かった。これらの結果は、分裂準備帯にリン酸化状態の異なるp34^<cdcZ> homologが存在することを示唆している。

In higher plants, the prephase band (PPB) is formed by the bundle of microtubules during prophase. This preparation for division is important in determining the position of division in the cell cycle. The possibility that protein kinase may be involved in the regulation of cell cycle progression during the process of mitotic preparation is shown<cdc2>. p34-<cdc2>homolog is activated by T-14, Y-15, which is the acid residue at position 14 and 15 of p34-<cdc2>homolog. T-14, Y-15 contain p34 <cdc2>in the preservation domain (GEGTYGVYK). The antibody was able to stain the cells at the root end of the cell, to identify the cells at the prophase, to identify the microtubule formation, to identify the p34 <cdc2>homolog, and to identify the microtubule formation at the same time. T-14, Y-15 and T-14 are in different acidification states. The results of staining of T-14, Y-15 and Y-15 in different acidification states show that T-14 and Y-15 have high binding properties. The result is that there is a difference between the acid state and the split preparation zone<cdcZ>.