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末梢血成熟単核球からのCD34陽性細胞の誘導〜血球の戻り分化は存在するか〜

外周血成熟单核细胞诱导 CD34 阳性细胞 - 血细胞是否存在回分化？

基本信息

批准号：
15659234
负责人：
伊藤仁也
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Foundation for Biomedical Research and Innovation
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

【目的】末梢血単核球を固相化CD3抗体とIL-2を用いて強く活性化させるかあるいは同様に末梢血CD4陽性細胞を活性化培養した培養上清にて末梢血単核球を培養するとCD34陽性細胞が出現してくる現象を発見した。本研究において、この末梢血単核球から出現してくるCD34陽性細胞が造血幹細胞としての機能を持つのかどうか、また造血細胞移植の第3の幹細胞ソースになり得るのか明らかにすることを目的とする。【方法】成人ボランティアより採血した血液からFicol比重遠心法にて単核球を分離した。RPMI 1640を基礎培地とする培養液にインスリン、ピルビン酸、オギザロ酢酸、IL-2を添加し、CD3抗体で固相化したフラスコにて7日間の培養を行った。7日後に細胞を回収し、フォローサイトメトリーにて表面抗原解析を行い、CD34陽性細胞の出現率を算出した。CD34陽性細胞の造血機能検査として、コロニー形成能とNOD/SCIDマウスへの移植による長期造血再構築能を検討した。【結果】CD34陽性細胞をnegatve selectionした末梢血単核球からも活性化培養を行うことにより、CD34陽性細胞が出現した。CD34と共発現する表面マーカーとしては、CD3陽性細胞が40%を占めたが、60%は他のLineageは陰性であった。他にCD38,HLA-DRを発現していた。この細胞はCFU-GM、およびBFU-Eのコロニーを形成した。またNOD/SCIDマウスに生着し、B cell,好中球、単球、赤芽球を産生した。【考察と結論】この現象はあらかじめT cellを活性化した培養上清にても再現することができることから、活性化T cellが産生するサイトカインに末梢血単核球からCD34陽性細胞を出現させる機能をもつものが存在すると考えられる。この細胞は造血幹細胞としての機能を有し、移植医療に貢献できるものと考えられる。

[Objective] The phenomenon of CD3 antibody immobilized in peripheral blood and IL-2 activated in culture supernatant of CD4 positive cells in peripheral blood was discovered. The purpose of this study is to investigate the development of CD34-positive cells and hematopoietic stem cell function in peripheral blood mononuclear cells, and to explore the development of hematopoietic stem cell transplantation as the third step in stem cell transplantation. [Method] Adult's blood samples were collected from Fico's gravity center and the nuclear spheres were separated. RPMI 1640 was added to the culture medium for basal culture, and CD3 antibody was immobilized for 7 days. After 7 days, the cell surface antigen was analyzed and the incidence of CD34 positive cells was calculated. Hematopoietic function of CD34-positive cells was investigated, and their long-term hematopoietic remodeling was investigated. [Results] CD34-positive cells appeared after negative selection and activation culture of peripheral blood mononuclear cells. CD3 positive cells accounted for 40% of CD3 positive cells and 60% of CD3 negative cells. CD38,HLA-DR were discovered. The cells are formed into CFU-GM, BFU-E and BFU-E. NOD/SCID is produced, B cell is produced, good ball is produced, red ball is produced. [Investigation and Conclusion] The phenomenon of T cell activation in culture supernatant is reproduced. The function of T cell activation in culture supernatant is examined. These cells have the function of hematopoietic stem cells and contribute to transplantation medicine.