歯根膜再生・人工歯根膜開発を目的とした歯根膜幹細胞の分化における遺伝子発現の解明-DNAマイクロチップを用いた歯根膜幹細胞の遺伝子発現の検索-

阐明以牙周膜再生和人工牙周膜发育为目的的牙周膜干细胞分化中的基因表达 - 使用DNA微芯片寻找牙周膜干细胞中的基因表达 -

• 批准号: 15659456
• 负责人: 横山 敦郎
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659456/
• 关键词: 歯根膜; 幹細胞; DNAマイクロチップ; RNA; デキサメサゾン; b-FGF; XII型コラーゲン; 骨芽細胞; 歯根膜再生; アルカリフォスファターゼ; オステオポンチン

本研究においては,歯根膜幹細胞の種々の細胞への分化に関する成長因子の同定および分化した細胞の遺伝子発現様式の差異を明らかにすることを目的に,以下の研究を行った.WKAウィスター系5週齢雄性ラットから,下顎切歯を抜去し,15%FBSおよび抗生剤を含むα-MEM中に静置し,2週後まで初代培養し,アウトグロースした細胞を歯根膜細胞として回収した.回収した細胞を,デキサメサゾン(Dex),アスコルビン酸(Asc),βグリセロフォスフェイト(βGP)を含む培地とこれらを含まないコントロールの培地の2種の培地で2週間培養し,骨関連タンパクであるオステオカルシンと歯根膜特有のタンパクであるXII型コラーゲンについてRT-PCRを行いmRNAの発現を検索した.XII型コラーゲンの発現は,コントロールとDexを含む培地の両者に同様に認められたが,オステオカルシンはDexを含む培地で著しく強く発現していた.この結果から,Dexで骨芽細胞に誘導される幹細胞が,採取された歯根膜細胞には含まれることが明らかとなった.この結果をもとに,Dexを含む培地,b-FGFを含む培地およびこれらを含まないコントロール培地の3種の培地で歯根膜細胞を3日培養した後,RNAを回収し,DNAマイクロチップで網羅的にmRNAの発現を解析した.その結果,mRNAの発現は,b-FGFを含む培地とコントロールの培地では,ほとんど差異が認められなかったが,Dexを含む培地とでは差異が認められた.この結果から,b-FGFは歯根膜幹細胞を分化させることなく増殖させ,またDexは,歯根膜幹細胞を骨芽細胞へ分化させることが示唆された.

In order to clarify the identity and differentiation of growth factors related to the differentiation of dental root membrane stem cells, the following studies were carried out.WKA stem cells were cultured at 5 weeks old in male, mandibular incisors were removed, 15% FBS and antibiotics were added to α-MEM, and primary culture was carried out after 2 weeks. The root membrane cells of the plant were cultured in vitro. Two kinds of culture medium were cultured for 2 weeks, and the expression of bone-related mRNA was detected by RT-PCR. The expression of mRNA was detected by RT-PCR. The expression of mRNA was detected by RT-PCR. The two sides of the strait are facing each other. As a result,Dex induced stem cells from bone buds, and took root membrane cells from root cells. The results showed that Dex,b-FGF and B-FGF were included in culture medium. Three kinds of cultured dental root membrane cells were cultured for 3 days. RNA was recovered and mRNA expression of DNA was analyzed. As a result, the discovery of mRNA, the difference between b-FGF and Kontaro, and the difference between Dex and Kontaro. The results showed that b-FGF could induce differentiation of root membrane stem cells and promote proliferation of bone bud cells.