ラット精子の凍結乾燥に関する基礎的研究

大鼠精子冷冻干燥的基础研究

• 批准号: 16650095
• 负责人: 中潟 直己
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16650095/
• 关键词: ラット; 精子; 凍結乾燥; ICSI

凍結乾燥後のラット精子は、受精能を保持しておりICSIによる受精後、雌雄両前核を形成することを前年度の研究において明らかにした。本年度は、凍結乾燥後のラット精子と受精した卵子のその後の発生について重点的に検討を行った。凍結乾燥法は前年度同様、Kanekoら(2003)のマウスでの方法に準じて行った。成熟したWisterラットの精巣上体尾部より回収した精子を凍結乾燥用保存液中に懸濁し、凍結乾燥機を用いて4時間乾燥させた。凍結乾燥精子は、冷蔵庫(4℃)で一定期間保存後超純水を用いて復水し、過排卵処理により得られた同系統の未受精卵子内にICSIを用いて精子を導入した。精子導入後の卵子は、R1ECM培養液に導入し、37℃、5%CO_2環境下で培養した。新鮮精子は本実験の対照区として用いた。その結果、新鮮精子および凍結乾燥精子の双方において、ICSI後の卵子は高率に受精することが確認され、受精卵の約90%が2細胞期にまで発生した。さらに、2細胞期胚の約20%が胚盤胞にまで発生することが確認された。本研究において、ラット精子は凍結乾燥後も受精能を保持しており、これら精子と受精した卵子は体外で胚盤胞にまで発生することが確認された。また、胚盤胞までの発生率は新鮮精子と受精した卵子と大きな差は見られなかった。ラット精子の凍結乾燥に関する報告が全くない中で、本研究は凍結乾燥法をラット系統保存法に応用するための貴重な成果となると思われる。今後の研究により、更なる向上が期待される。

After freezing and drying, the sperm can be kept fertile, and the sperm can be formed before the ICSI. This year, we will discuss the key issues of sperm fertilization and egg development after freezing and drying. Freeze-drying method is the same as Kaneko's (2003). Mature sperm are suspended in a freeze-drying preservation solution and dried in a freeze-drying machine for 4 hours. Freeze-dried sperm is stored in cold storage (4℃) for a certain period of time, and ultra-pure water is used for rehydration and ovulation treatment. ICSI is used for sperm introduction into the same system. After sperm transfer, eggs were cultured in R1ECM medium at 37℃ and 5% CO2. Fresh sperm are used in the field of sperm production. The results showed that fresh sperm and freeze-dried sperm had a high rate of fertilization after ICSI, and about 90% of fertilized eggs were born at the 2-cell stage. About 20% of embryos at the 2-cell stage were confirmed to have blastoderm cells. In this study, we confirmed that sperm could be fertilized after freezing and drying, and that sperm and eggs could be fertilized in vitro. The rate of reproduction of blastoderm cells is different from that of fresh sperm and fertilized eggs. This paper reports on the application of freeze-drying method in sperm preservation. Future research is expected.

项目成果

Relation between storage temperature and fertilizing ability of freeze-dried mouse spermatozoa.

冻干小鼠精子的保存温度与受精能力的关系。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Comp Med. 55(2)
• 作者: Kaneko;T.;Nakagata;N.
• 通讯作者: N.

Recombinase-mediated mouse transgenesis by intracytoplasmic sperm injection.

通过胞浆内精子注射重组酶介导的小鼠转基因。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Theriogenology 64
• 作者: Kanatsu-Shinohara;M.et al.;Tadashi Nakagawa et al.;Tadashi Nakagawa et al.;Tadao Ishikawa;高木 都;Miyako Takaki;Takehito Kaneko
• 通讯作者: Takehito Kaneko

Use of frozen-thawed oocytes for efficient production of normal offspring from cryopreserved mouse spermatozoa showing low fertility.

• 发表时间: 2005-04
• 期刊: Comparative medicine
• 影响因子: 0.8
• 作者: Wataru Sakamoto;T. Kaneko;N. Nakagata

Genetically Engineered Mice Handbook

基因工程小鼠手册

• 发表时间: 2005
• 作者: Oishi;I.
• 通讯作者: I.