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ビタミンB_1強化発酵食品開発のための有用酵母の構築

用于开发富含维生素B_1的发酵食品的有用酵母的构建

基本信息

批准号：
16650187
负责人：
川崎祐子
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Doshisha Women's College of Liberal Arts
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16650187/
关键词：
酵母ビタミンB_1 チアミン

项目摘要

平成16年度に引き続いてthi81変異株に酵母ゲノムライブラリーを導入し、thi81変異の機能相補スクリーニングによりTHI81遺伝子を単離することを試みたが、現在までのところ成功していない。また、酵母1遺伝子破壊株ライブラリーキットを用いて、B_1生合成に関与するホスファターゼ遺伝子の同定を試みるためスクリーニングを行った。ホスファターゼ活性を持つ可能性の高い塩基配列である遺伝子を破壊した株28株について、それぞれの細胞から抽出した粗抽出液を用いてB_<1->1リン酸(TMP)ホスファターゼ活性を測定するとともに、B_1添加無添加液体培地における生育の違いを親株と比較した。しかし、明確にTMPホスファターゼ活性が低下している破壊株も、B_1要求性を示す破壊株も見出すことはできなかった。これと平行して、B_1代謝に関与する遺伝子の発現を正に調節する2つの遺伝子、THI2、THI3がコードするたんぱく質の機能について検討した(Molecular Microbiology 58(2) pp467-479)。DNAマイクロアレイ解析の結果、B_1欠乏によりTHI遺伝子群の発現は10倍から90倍に増加し、THI2、THI3の発現もそれぞれ17倍、3倍に増加していた。B_1添加培地から無添加培地に移すと2つの遺伝子ともプロモーター活性は同じくB_1遺伝子群の1つであるPHO3と同様に上昇した。THI3を破壊するとTHI3プロモーター活性の働きも低下し、THI3たんぱく質は自身の遺伝子発現を調節していることが明らかとなった。

In 2016, the introduction of THI 81 mutant yeast was successful. The yeast 1 gene was isolated from the plant and used in the synthesis of B_1 gene. 28 <1->strains were isolated from the medium containing TMP, and the crude extract was used to determine the activity of TMP. TMP activity is very low, and B1 activity is very low. The relationship between B_1 metabolism and gene expression is positively regulated by the function of gene expression, THI2 and THI3 (Molecular Microbiology 58(2) pp467-479). The results of DNA sequencing showed that B_1 deficiency increased by 10 to 90 times, THI2 and THI3 increased by 17 to 3 times. B_1 added to the culture field, no added to the culture field, no added to THI3 is the most important factor in the development of THI 3.