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細胞外基質の時空間制御および細胞ダイナミクス誘導による腎組織の形成

通过细胞外基质的时空控制和细胞动力学诱导形成肾组织

基本信息

批准号：
16656252
负责人：
王碧昭
金额：
$ 1.86万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

腎臓の発生は他の臓器と異なり、二つ別×の始原から出発、其々尿管と糸球体を生成する。この二つの始原の相互作用は異なる基質段階を経て、最後にネフロンを構成する。本研究は、腎臓発生期に発現する複数のコラーゲンを中心とし、損傷細胞の再生環境を築くことを最終目標とする。そのため、細胞が再生する際、細胞と足場が緊密付着よりもダイナミックな付着することに着目し、発生期の外的環境を模倣し、基底材料をV型-IV型コラーゲンで重層する。腎糸球体細胞が時間的に基質から付着、脱着を可動化し、空間的に凝集して、糸球体を形成することを目的とする。本年度の研究は、以下の点を明らかにした。(1)マウス発生期(胚性E11,E13,E15,E17)の後腎組織を其々取得し、コラゲナーゼ処理後、腎組織をV型コラーゲン再構成繊維上で培養する。V型コラーゲン繊維が発生腎臓に及ぼす影響を、免疫染色、共焦点顕微鏡観察とタイムラプスで観察した。その結果、V型コラーゲンは培養した後腎において、帯状高次構造を形成し尿管芽先端に巻きついていることを明らかにした。また、培養後腎は、V型コラーゲン繊維の足場情報により、後腎間充織中で閉鎖血管構造を形成することも明らかにした。(2)胚性期各時期のマウスの後腎組織をコントロールとして、組織取得後、すぐに凍結、切片化、各発生期におけるV型コラーゲンの局在とIV型コラーゲン、フイブロネクチンなど、V型コラーゲンからバトンタッチされる次環境ECMの局在を調べた。その結果、V型コラーゲンは発生後腎成長面に近い未成熟糸球体に局在、逆にIV型コラーゲンは発生後腎内部の成熟糸球体に局在、ECMバトンタッチが行われている。(3)アダルトの腎疾病モデルマウスから腎臓を摘出、mesh seiving法により、糸球体を取得する。V型コラーゲン繊維内で糸球体を培養してから、発生期の胚性腎臓と共培養する。その結果、アダルトの糸球体が発生腎の尿管芽先端に付着、融合することが可能となった。共焦点蛍光顕微鏡で観察した結果、発生期後腎尿管芽先端にアダルト進級態が近づくと、間充織細胞を巻き込んだシャープなV型コラーゲン繊維が尿管芽先端を糸球体間に形成されることを認めた。これらの結果より、V型コラーゲンが超高次構造ECMを介したcell-ECM-cell間相互作用を緩やかに誘導し、腎発生における基調ECMとして働き、毛細血管組織である腎糸球体と尿管芽との融合を助長するECMであることが明らかにした。

The development of the kidney is related to the differentiation of other organs, the origin of the two organs, the development of the urinary tract and the formation of the ball. The initial interaction of these two elements varies from matrix stage to final stage. The aim of this study is to establish a complex environment for the development of kidney cells. When cells are regenerated, cells and foot fields are closely related to each other, and the environment outside the growth period is imitated. The substrate material is V-IV type. The matrix of the kidney is attached and detached, and the aggregation of the kidney is formed. This year's research is focused on the following issues: (1)The metanephric tissues at embryonic stage (embryonic E11,E13,E15,E17) were obtained, treated, and then re-cultured in V-type. V-type kidney disease and its effects, immunostaining, confocal microscopy, and microscopical examination As a result, the V-shaped structure of the kidney is formed after culture, and the high-order structure of the urinary tract is formed. After culture, the V-shaped kidney will maintain sufficient field information, and the closed vascular structure will be formed in the mesenchyme of the kidney. (2)During the embryonic period, the metanephric tissue was frozen, sliced, and developed at various stages. The sub-environmental ECM was regulated at various stages, such as type IV, type V, and type IV. The results are as follows: V-type C-type C (3)Kidney disease, kidney disease V-type cells are cultured in vitro and co-cultured with embryonic kidneys at developmental stage. The result is that the ball is attached to the tip of the urinary duct, and the fusion is possible. Confocal point microscopy was used to examine the results. After development, the tip of the ureter bud was in a progressive state. The mesenchymal cells were in a V-shaped state. The tip of the ureter bud was formed between the spheres. As a result, V-type structural ECM mediates cell-ECM-cell interactions, and the development of renal cells facilitates the fusion of renal cells and ureters.