誘導型RNAi変異体バンクを利用したショウジョウバエ生殖細胞雌性化因子の探索

使用诱导性 RNAi 突变体库寻找果蝇生殖细胞女性化因子

• 批准号: 16657004
• 负责人: 高橋 邦明
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16657004/
• 关键词: ショウジョウバエ; 生殖細胞; 性決定; GAL4; UASシステム; RNAi; 遺伝子ノックダウン

本研究では、雄生殖細胞特異的な発現を示す遺伝子、mgm1を指標に、ショウジョウバエ全遺伝子の誘導型RNAi変異体バンクを利用したスクリーニングを行い、生殖巣側から生殖細胞へ作用し、生殖細胞での性的二型を誘導する因子を同定することを目的に研究を行ってきた。生殖巣から生殖細胞への性的二型を誘導する因子をスクリーニングするに当たっては、胚期から3令幼虫期まで継続してRNAiを発現させる必要があるため、時期特異的な2つのGAL4ドライバー、twist GAL4とNP1624を組み合わせて使用した。当該期間におけるスクリーニング数は、幼虫期の生殖巣に発現するGAL4ドライバーの選別に手間取り、実数として4,000系統(2,500遺伝子分)にとどまった。しかしながら、スクリーニング数の減少を補うため、生殖巣に強く発現していると考えられる遺伝子約500個をin situ発現データベースから抽出することにより、スクリーニング効率の上昇に努めた。上記方法にてスクリーニングを行った2,500遺伝子のうち、幼虫期の雌の生殖細胞でマーカー遺伝子の発現が認められた遺伝子は110個であった。残念ながら、これら110個の遺伝子中には本来の目的である生殖細胞雌性化因子に該当すると考えられる遺伝子は含まれていなかったが、雌特異的な致死性を示す既知の遺伝子、Female sterile(2)Ketelやタンパク分解系のシグナル伝達に関与するUbiquitin activating enzymeなどが含まれており、このスクリーニングを継続することで生殖細胞雌性化因子に該当する遺伝子を同定することが可能であると考えられる。現在、最もマーカー遺伝子の発現が高かったUbiquitin activating enzymeについての詳細な解析を行っており、体細胞側から生殖細胞側へのシグナル伝達系に、タンパク分解系の経路がどのように関与しているのかを明らかに出来ると考えている。今後は継続してスクリーニングを行い、可能な限りスクリーニングする遺伝子の数を増やすことで、生殖細胞雌性化因子に該当すると考えられる遺伝子の同定に努めたい。

This study was conducted to investigate the role of male germ cell-specific gene expression, mgm1 as an indicator, and the use of inducible RNAi variants in male germ cell-specific gene expression, reproductive cell-specific gene expression, and reproductive cell-specific gene expression. The two types of factors that induce sexual differentiation in reproductive cells are required for the development of RNAi at the embryonic stage and at the larval stage. The two types of factors are used in combination with GAL 4 and NP1624 at the stage specific. During this period, the number of larvae and larvae in the reproductive stage occurred, and the number of larvae in the reproductive stage occurred. About 500 eggs were found in situ, and the number of eggs decreased. The method described above contains 2,500 offspring and 110 offspring in female germ cells at larval stage. Among the 110 genes, there are 10 Female genes, and the female genes are 10 female genes. The female genes are 10 female genes, and the female genes are 10 female genes. This is the first time that a female germ cell has been identified. Now, the development of Ubiquitin activating enzyme is very high, the somatic cell side is very high, the germ cell side is very high, and the decomposition system is very high. In the future, it is possible to limit the number of offspring and the feminization factor of germ cells.