軟体動物胚極葉に局在するpoly(A)^+RNAに対するcDNAライブラリの作成

创建位于软体动物胚胎极叶的 Poly(A)^+ RNA 的 cDNA 文库

• 批准号: 16657063
• 负责人: 出野 卓也
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Osaka Kyoiku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16657063/
• 关键词: 極葉; 軟体動物胚; デターミナント; poly(A)^+RNA; cDNAライブラリ; 細胞分化

アラムシロガイ三葉期胚の極葉にのみ局在するpoly(A)^+RNAを単離し、cDNAライブラリを構築する目的で、抽出用試料を集めた。16年度には、アラムシロガイ卵嚢を冷海水中で選別し、発生を進めることなく未卵割受精卵や三葉期胚を集める方法を開発したが、昨年度、今年度と2年続けて産卵最盛期に研究室の空調設備並びに恒温室が次々と故障したため、アラムシロガイの産卵が不調に終わり、RNA抽出に十分な量の試料を集めることができなかった。昨年度から、極葉を形成しないが解剖による採卵採精が可能であり、卵を多量に得られるためにRNAの抽出には便利なバカガイを用いて、total RNAならびにpoly(A)^+RNAの抽出・精製を試みていたが、今年度も急に産卵期が終わったため、十分量の試料確保ができなかった。しかし、試料の保存方法や抽出方法を検討することができ、poly(A)^+RNAの抽出・精製にもめどが立てられた。次年度の繁殖期に必要量のpoly(A)^+RNAを精製し、cDNAライブラリの作成に取りかかる予定である。一方、バカガイのゲノムライブラリの作成を試み、精子からゲノムDNAを抽出し、現在ベクターに組み込む実験を行っている。予備実験として行ったイトマキヒトデゲノムライブラリの作成には成功しているので、本種でも間もなく完成できると考えている。また昨年度より、温度処理と電気刺激により受精可能な卵を産卵し、極葉を形成するムラサキイガイも研究対象に加えたが、昨年発見した大阪湾内の新しい棲息地では、貝がヘドロをかぶるなど環境が悪いためか、貝の成熟状態があまりよくなく、刺激を与えても産卵する個体数も、また個々の貝の産卵量も少ないため、十分な試料を集めることができなかった。更にこの冬は記録的な暖冬のため、採卵そのものができなかった。もうすぐ新年度のアラムシロガイの産卵期に入るはずなので、産卵が安定すれば、未卵割受精卵及びAB・CD割球の単離を再開する予定である。

ア ラ ム シ ロ ガ イ 3 leaf stage embryo の extremely leaf に の み bureau in す る poly real ^ (A) + RNA を 単 し, cDNA ラ イ ブ ラ リ を build す で る purpose, try out with を set め た. 16 year に は, ア ラ ム シ ロ ガ イ eggs 嚢 を cold seawater で choose don't し, 発 を into め る こ と な く has eggs fertilized egg や 3 leaf stage embryo を set め る method を open 発 し た が 2 years, last year, this year と 続 け て to spawn the stage に の air-conditioning equipment and lab び に greenhouse が time constant 々 と fault し た た め, ア ラ ム シ ロ ガ イ の laying eggs, do not move が に わ Youdaoplaceholder0 and RNA were extracted to obtain に tenths of the な sample を set める な とがで な な な った った. Yesterday's annual か ら, extremely leaf を し な い が anatomical に よ る collect eggs ejaculations が may で あ り, egg を に abundant ら れ る た め に RNA の spare に は convenient な バ カ ガ イ を with い て, total RNA な ら び に poly real (A) try ^ + RNA の drew, refined を み て い た が, our も urgent に spawning period が わ っ た た め, ten component の sample to ensure が で き な か っ た. し か し, try の preservation method や spare を beg す 検 る こ と が で き, poly real ^ (A) + RNA の drew, refined に も め ど が made て ら れ た. Annual の breeding season に necessary amount の poly real ^ (A) + RNA を refined し, cDNA ラ イ ブ ラ リ の made に take り か か る designated で あ る. Party, バ カ ガ イ の ゲ ノ ム ラ イ ブ ラ リ の made を み, sperm か ら ゲ ノ ム を DNA extraction し, now ベ ク タ ー に group み 込 む be 験 を line っ て い る. Line to be prepared 験 と し て っ た イ ト マ キ ヒ ト デ ゲ ノ ム ラ イ ブ ラ リ の made に は successful し て い る の で, this kind of で も between も な く complete で き る と exam え て い る. ま た yesterday annual よ り, temperature 処 と electric 気 stimulus に よ り fertilization may し を な eggs laying eggs, a leaf を form す る ム ラ サ キ イ ガ イ も research like に seaborne plus え た が, yesterday see 発 し た Osaka bay の new し い habitat で は, bei が ヘ ド ロ を か ぶ る な ど environment が 悪 い た め か, bei の mature state が あ ま り よ く な く, stimulate を and え て も lay eggs す number も, ま る individual た a 々 の bei の spawning fewer も な い た め, very な sample を set め る こ と が で き な か っ た. The な warm winter な ため and egg collection そ <s:1> <s:1> がで がで がで な な な った った are also recorded. New Year も う す ぐ の ア ラ ム シ ロ ガ イ の spawning period に into る は ず な の で, spawning が stable す れ ば, not cut fertilized egg and び AB CD cut the ball の 単 from open another す を る designated で あ る.