ウシ栄養膜細胞を用いたインターフェロンタウ産生バイオリアクター構築に関する研究

牛滋养层细胞构建干扰素tau生物反应器的研究

• 批准号: 16658110
• 负责人: 高橋 ひとみ
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: 独立行政法人農業・生物系特定産業技術研究機構
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16658110/
• 关键词: インターフェロンタウ; ウシ栄養膜細胞; 妊娠認識物質; バイオリアクター

インターフェロンタウ(IFNτ)は着床前の胎盤を形成する栄養膜細胞から分泌され、反芻家畜の妊娠成立・維持に不可欠の妊娠認識物質として知られ、また抗ウイルス活性を示すことからその利用が期待されている。当研究グループではin vitroにおいてIFNτ分泌能を保持したウシ栄養膜細胞を継代・維持しているが、本来の産生細胞を用いたIFNτ産生バイオリアクター構築には、細胞の増殖・分化の制御が必要となる。本細胞の継代処理に酵素分散は適さず、物理的に接着面を剥離した細胞塊として継代している。しかし、この手法は平面に限定されるため、立体あるいは多層の培養坦体にも運用できる継代・細胞回収方法が必要である。本年は温度応答性高分子を修飾した培養皿を用い、細胞接着面の親水性を制御することで栄養膜細胞を細胞塊とし、継代後の細胞増殖能を検討した。と場由来の卵巣を用い、定法により体外受精後、透明帯脱出胚盤胞を5%FCS添加DMEM液により培養し、増殖した栄養膜細胞を供試材料とした。温度応答性高分子・ポリN-イソプロピルアクリルアミドモノマー(PIPAAm)溶液を塗布、グラフト処理したポリスチレン培養皿にウシ栄養膜細胞を播種し、その後の細胞接着を観察した。PIPAAmグラフト処理した培養皿上で上皮系培養細胞の接着増殖は良好とされているが、ウシ栄養膜細胞では播種後の接着増殖が不安定であった。そのため、コラーゲンtype-1Cの薄層処理を追加したところ、ウシ栄養膜細胞の接着状況が安定した。PIPAAならびにコラーゲン薄層処理した培養皿は30分程度の室温感作で培養皿面が親水性に相転移し、栄養膜細胞を細胞塊として上方へ遊離させることができた。その後の増殖能は、物理的手法で継代した場合と同様であった。これより立体的な培養坦体に播種したウシ栄養膜細胞の効率的な回収に適用可能な知見が得られた。

イ ン タ ー フ ェ ロ ン タ ウ (IFN tau) は の placenta before implantation を form す る tech students.their ownship keep membrane cells か ら secretion さ れ, ruminant livestock の pregnancy was set up, maintain に known substances do not owe の pregnancy と し て know ら れ, ま た resistance ウ イ ル を ス activity in す こ と か ら そ の using が expect さ れ て い る. When the グ ル ー プ で は in vitro に お い て IFN tau secretion can keep し を た ウ シ tech students.their ownship keep membrane cells を 継 generation, maintain し て い る が, originally の cells を using い た IFN tau produce バ イ オ リ ア ク タ ー build に は, differentiation, cell の raised colonization の suppression が necessary と な る. This cell の 継 は 処 reason に enzyme and dispersive generation optimal さ ず, physical に then を stripping し た cell block と し て 継 generation し て い る. し か し, こ の gimmick は plane に qualified さ れ る た め, three-dimensional あ る い は multilayer の cultivate temple body に も using で き る 継 · cells back 収 method が necessary で あ る. This year は temperature 応 a sexual を polymer modified し た の を い, cell culture dish and then surface hydrophilic を suppression す る こ と で tech students.their ownship keep membrane cells を block と し, 継 の cells raised after colonization can を beg し 検 た. と field origin の eggs 巣 を using い, に よ り after in vitro fertilization, transparent 帯 out blastoderm cell を 5% FCS added DMEM liquid に よ り し, raised colonization し た tech students.their ownship keep membrane cells を と the germplasms し た. Temperature 応 polymer, a sex ポ リ N - イ ソ プ ロ ピ ル ア ク リ ル ア ミ ド モ ノ マ ー を coating (PIPAAm) solution and グ ラ フ ト 処 Richard し た ポ リ ス チ レ ン petri dish に ウ シ tech students.their ownship を seeding し membrane cells, そ の の cells then を 観 examine し た. PIPAAm グ ラ フ ト 処 Richard し た petri dish で epithelium of cultured cells の then raised colonization は good と さ れ て い る が, ウ シ tech students.their ownship keep membrane cells で は の then raised after sowing colonization が unrest で あ っ た. そ の た め, コ ラ ー ゲ ン type 1 c の thin layer 処 Richard を additional し た と こ ろ, ウ シ の tech students.their ownship keep membrane cells then condition が settle し た. PIPAA な ら び に コ ラ ー ゲ ン thin layer 処 Richard し た petri dish は 30 degree の room temperature sense as finish planning が hydrophilic に phase shift で petri dish し, tech students.their ownship membrane cells を block と し て へ above free さ せ る こ と が で き た. After そ そ, the expansion energy of そ and physical methods で継 replace the と in た situations と and であった are the same. こ れ よ り stereo な cultivate temple body に seeding し た ウ シ tech students.their ownship keep membrane cells の な 収 back sharper rates may な に apply knowledge が have ら れ た.

项目成果

Establishment of a specific radioimmunoassay for bovine interferon τ

牛干扰素τ特异性放射免疫分析方法的建立

• 发表时间: 2005
• 期刊: Theriogenology 63・4
• 作者: H Takahashi;M Takahashi;H Nagaya;M Hirako;K Sawai;A Minamihashi;S Inumaru;Y Yokomizo;M Geshi;A Okano;K Okuda
• 通讯作者: K Okuda

Establishment of a Large-Scale Purification Procedure for Purified Recombinant Bovine Interferon- c Produced by a Silkworm-Baculovirus Gene Expression System

家蚕杆状病毒基因表达系统纯化重组牛干扰素的大规模纯化工艺的建立

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Veterinary Medical Science 66・11
• 作者: H Nagaya;T Kanaya;H Kaki;Y Tobita;M Takahashi;H Takahashi;Y Yokomizo;S Inumaru
• 通讯作者: S Inumaru

Large-Scale Production and Purification of Biological Active Bovine Interferon τ : Possible Application to Increase Embryonic Development

生物活性牛干扰素 τ 的大规模生产和纯化：可能应用于促进胚胎发育

• 发表时间: 2006
• 期刊: Bulletin of National Institute of Livestock and Grassland Science 6
• 作者: Matsuda;K. et al.;H Takahashi
• 通讯作者: H Takahashi