メルカプトプリン投与による肝障害とキサンチンオキシダーゼ(XO)遺伝子多型解析

巯嘌呤引起的肝损伤及黄嘌呤氧化酶（XO）基因多态性分析

• 批准号: 16659041
• 负责人: 金野 由美子
• 金额: $ 3.52万
• 依托单位: Tohoku Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659041/
• 关键词: キサンチンオキシダーゼ; 遺伝子多型; SNP; DHPLC; メルカプトプリン; 肝障害

キサンチンオキシダーゼ(XO)は生体内において、プリン代謝の最終段階を触媒する酵素であり、医薬品では6一メルカプトプリン(6-MP)の肝臓での解毒代謝に関与している。したがってXOの遺伝子多型による酵素活性の異常が6瑚Pの副作用、特に肝障害に影響を及ぼす可能性がある。今回、野生型XOエントリークローンを基にsite-directed mutagenesis法により各々の変異を導入後、哺乳類細胞発現用ベクターに乗せ換えることで変異型XO発現用クローンを得た。21種類の変異型XOをCOS-7細胞に発現させ、S-9画分を調製した。XOタンパクの発現は抗ヒトXO抗体を用いたイムノブロット法により確認した。次に、基質であるキサンチンを1.2μM-24pμMの濃度範囲でin vitro代謝させ、HPLCにより代謝物である尿酸を定量し、XO酵素活性を算出した。キネティックパラメータはEadie-Hofstee plotを用いて算出し、野生型と変異型XOの酵素機能特性を比較した。その結果、21種類全ての変異型XOの哺乳類細胞発現用クローンを構築し、変異型XOを発現させることができた。これら変異型XOのうち、Arg149Cys及びThr910Lys型では酵素活性が検出限界以下、Arg607Gln、Thr623I1e、Asn909Lys及びCys1318Tyr型では酵素活性の有意な低下が認められた。また、His1221Arg型で酵素活性の有意な上昇が認められた。XO酵素活性の低下を示す変異では、肝臓での6-MP代謝能の低下が予測され、TPMT酵素活性の低下では説明のできなかった肝機能障害の発症リスクに寄与する可能性が示唆された。XO酵素活性が上昇する変異では、肝臓での6-MP代謝が促進されることが考えられ、6-MPによる副作用発現リスクの低下が予想された。その一方、血中へ移行する薬物量の低下が示唆され、急性リンパ芽白血病再発リスクの上昇が考えられた。

キ サ ン チ ン オ キ シ ダ ー ゼ (XO) は born in vivo に お い て, プ リ ン metabolic の eventually Duan Jie を catalyst す る enzyme で あ り, medical 薬 で は 6 a メ ル カ プ ト プ リ ン (6 MP) crucial の liver で の detoxification metabolism に masato and し て い る. し た が っ て XO の posthumous son 伝 polymorphism に よ る enzyme activity の abnormal が Hu 6 P の side effects, special に liver handicap of に influence を and ぼ す possibility が あ る. Today back to the wild type, which is the XO エ ン ト リ ー ク ロ ー ン を base に site - directed mutagenesis method に よ り each 々 の - different を after import, mammalian cell 発 current ベ ク タ ー に 乗 せ in え る こ と で - alien XO 発 current ク ロ ー ン を た. 21 types of variant XOをCOS-7 cells に present させ, S-9 partition を modulated た た. XOタ パ パ パ パ パ た the development of <s:1> anti-ヒ トXO antibody を is confirmed by the によ た ムノブロット ムノブロット ムノブロット ムノブロット ムノブロット method によ た. に, matrix で あ る キ サ ン チ ン を 1.2 mu M - 24 p fei mu M の concentration 囲 で the in vitro metabolism さ せ, HPLC に よ り metabolites で あ る uric acid を quantitative し, XO enzyme activity を calculate し た. キ ネ テ ィ ッ ク パ ラ メ ー タ は can - Hofstee plot を with い て calculate し, wild type と properties - alien XO の enzyme function are を し た. そ の results, 21 species て の - alien XO の mammalian cells 発 current ク ロ ー ン を build し, XO - heteromorphosis を 発 now さ せ る こ と が で き た. こ れ ら - alien XO の う ち, Arg149Cys and び Thr910Lys type で は enzyme activity が 検 below threshold, Arg607Gln, Thr623I1e, Asn909Lys and び Cys1318Tyr type で は low enzyme activity の intentionally な が recognize め ら れ た. The activity of また and his1221arg-type で enzymes is expected to な increase が. XO low enzyme activity の を shown す - different で は routine, liver で の 6 - MP metabolism to low の が to measuring さ れ TPMT and enzyme activity of low の で は illustrate の で き な か っ た liver function handicap of の 発 disease リ ス ク に send す が る possibility in stopping さ れ た. XO が enzyme activity rose す る - different で は routine, liver で の 6 - MP metabolism が for さ れ る こ と が exam え ら れ, 6 - MP に よ 発 る side effects now リ ス ク の low が to think さ れ た. そ の side, blood へ transitional す る 薬 volume low の が in stopping さ れ, acute リ ン パ bud leukemia again 発 リ ス ク の rise が exam え ら れ た.