内皮系超低増殖細胞によるライ菌の長期体外培養法の樹立

超低增殖内皮细胞体外长期培养麻风分枝杆菌方法的建立

• 批准号: 16659296
• 负责人: 増澤 真実子
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659296/
• 关键词: ライ菌; SLG細胞; 28℃; 16S rRNA primer; 超低増殖細胞; ヒト血管肉腫; Thai53株

昨年度、超低増殖細胞(SLG細胞)の培養条件の設定温度として、34℃と報告した。しかし、ライ菌の組織内最適増殖温度条件が30〜27℃とされていることから、さらにライ菌の温度条件にあったSLG細胞の最適培養温度条件を検討した。SLG細胞は28℃にすると、細胞増殖はほぼ停止状態になった。細胞数の倍加時間は5000時間を超えた。細胞は一部ヒトデ型に変形するが、剥離や細胞融解を起こすことはなかった。この28℃はライ菌組織内最適増殖温度条件の30〜27℃の範囲内であり、ライ菌、SLG細胞双方にとって最適条件と考えられる。今年度の研究予定であった、SLG細胞内ライ菌の増菌を確認するための経時的SLG細胞内菌数、Shepard法による菌数とATP値は正確な値が計測できなかった。理由はライ球を障害せず単菌にして各細胞に均一に感染させられなかったためで、菌数を測定することができなかった。Shepard法による分離菌数やATPの測定は出来ているが、分離中の菌のロスが多く、安定したデータとはならなかった。ライ菌の分離手技向上は今後の課題として残された。上記の方法に代えて生菌として増殖している確証を得るために、ライ菌特異的16S rRNA primier P2,P3を用いたcomparative RT-PCRによるRNAの比較定量を行った。この結果、4ヶ月の培養期間中にRNAが約8倍に増加した。この結果からライ菌のSLG細胞内での増殖倍加時間は約14日前後と推察された。分離菌のマウスフットパッドへの接種実験は菌数的に十分採取できなかったことから、まだ明らかな足底の腫脹は見られていない。上記の最適培養温度28℃が設定されたことで、分離菌のSLG細胞への継代感染には成功しており、2回の継代で現在、感染実験の最長は8ヶ月に達し、さらに培養は継続されている。

Last year, ultra-low colony cell (SLG cell) culture conditions set temperature, 34 ℃ report temperature. The temperature conditions of the most colonized bacteria in the tissue were 30: 27 ℃ and 27 ℃. The temperature conditions of the bacteria, the temperature conditions of the SLG cells, the temperature conditions of the bacteria, the temperature conditions, the temperature conditions. SLG cells were incubated at 28 ℃, and the colonization stopped at 28 ℃. The number of cells is doubled and the time is exceeded by 5000. The cell is in the shape of a cell, and the cell of the cell is dissolved. In the range of 30-27 ℃, the optimum conditions for the growth of bacteria, bacteria and SLG cells in the tissue were studied. In this year's study, the number of intracellular bacteria in SLG and the number of bacteria in SLG during the period of confirming the number of bacteria in SLG, the number of bacteria in ATP and the number of bacteria in ATP are correct. The reason is that all cells are infected with bacteria, bacteria and bacteria. The number of isolated bacteria was determined by Shepard method and the number of isolated bacteria was determined by ATP. The fungus is separated from the hand technology, and the future problem will be broken. In the last part of the method, the 16s rRNA primier P2 and P3 of the bacteria were used to determine the quantity of the bacteria, and the 16s rRNA primier P2 and P3 of the bacteria were used to compare the quantity of the bacteria with the RNA. The results showed that during the 4-month training period, the RNA was increased by about 8 times. Results the doubling time of intracellular colonization of bacterial SLG was examined before and after 14 days. The number of bacteria isolated from different strains of bacteria was measured and the number of bacteria was collected. The number of bacteria was measured in the bottom of the foot. The highest temperature of culture is 28 ℃, the temperature of culture is 28 ℃, the cell culture of SLG is successful, the second cycle of infection is present, the maximum of infection is 8 months, and the culture of bacteria is stable.

项目成果

超低増殖細胞株

超低增殖细胞系

• 发表时间: 2005