SIAH1の肝発癌における関与の解明と肝癌遺伝子治療の可能性に関する研究

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前年度の研究で肝細胞癌におけるSIAH1の発現低下の機序として肝細胞癌の臨床検体100例を用いたRT-PCRによるSIAH1の発現、LOH解析、メチレーション解析からhaploinnsufficiencyの可能性が示唆された。次にin vitoroでのSIAH1の機能を解析した。hepatoma cell linesにおいてSIAH1の発現が低下しているHepG2,Huh7,SNU475を用いてCell viability assayを行うと、いずれもAd-SIAH1導入した細胞にviabilityの低下と細胞増殖抑制がおこった。次にflow cytometry、TUNEL assayを行うとAd-LacZと比べAd-SIAH1を導入したCell linesでsub-G1の増加、アポトーシス細胞の増加を認めた。次にSIAH1導入によるWntシグナル伝達系(Wnt系)に及ぼす影響を調べた。TCF4 assayではWnt系に異常の認めたHepG2とSNU475においてWnt系の亢進を認め、Ad-SIAH1を導入すると抑制された。β-カテニンのwestern blottingを行うとAd-SIAH1導入によりwild typeのβ-カテニンは分解されたがHepG2に認められるmutant typeのβ-カテニンは分解されなかった。そこで蛍光免疫染色でβ-カテニンの細胞内局在を検討したらHepG2で核に集積していたβ-カテニンがAd-SIAH1導入により核外に局在が変化した。よってHepatoma cell linesにおいてAd-SIAH1導入によるWnt系への影響はβ-カテニンの細胞内分解と局在変化によりWnt系を抑制している可能性がある。今後SIAH1導入の効果をin vivoにおいても検討する予定である。