陽イオン化ゼラチンを用いた新しい遺伝子デリバリー技術の開発と臨床応用への基礎検討

新型阳离子明胶基因递送技术的开发及临床应用基础研究

• 批准号: 16659362
• 负责人: 内藤 和世
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659362/
• 关键词: 陽イオン化ゼラチン; 遺伝治療; 遺伝子デリバリー; 消火器癌遺伝子治療; NK4

ゼラチンは生体内の酵素で容易に分解されまた化学的修飾、加工が容易であり、数々の薬物、蛋白のキャリアーとして利用されている。今年度、我々は、ゼラチンを陽イオン化させることによりDNAプラスミドと複合体を形成し、種々の細胞に対しin vitroでの遺伝子導入実験を試み、またin vivoでの遺伝子発現についても検討した。【陽イオン化ゼラチン粒子の作製】ゼラチンを陽イオン化し、グルタールアルデヒドにより架橋し、直径10から20μmのゼラチン粒子を作製した。また、陽イオン化ゼラチンを蒸留水に溶解し、ゼラチン水溶液とした。ゼラチン粒子あるいは水溶液をプラスミドDNAと混合し、複合体を作製した。複合体は電化のバランスが最適になるようにゼラチン単位あたりの最適DNA量を決定した。【in vitroでの遺伝子導入】COS-7やNIH3T3細胞およびヒト胃癌細胞株MKN74などの哺乳類動物細胞に陽イオン化ゼラチン水溶液での遺伝子発現を認めた。しかし、ゼラチン粒子ではin vitroでは分解までに時間がかかり、明らかな遺伝子発現を確認できなかった。また遺伝子発現の程度は市販のリポフェクタミンよりはやや劣るものであった。また、ヒト末梢血単球より誘導した樹状細胞に対する遺伝子導入にも成功した。【in vivoでの遺伝子導入】ゼラチン粒子をマウス腹腔内へ投与したところ、大網や腸間膜に分布する乳斑組織に集積することを確認した。そこで、ゼラチン粒子-プラスミドDNA複合体をマウス腹腔内投与し、乳斑における遺伝子発現の有無について検討した。マーカー遺伝子としてGFPを用いたところ、同部位における選択的な遺伝子発現が得られた。現在、腹膜転移治療を想定し、NK4、IL-12などの治療遺伝子を用いた遺伝子発現の検討を行っている。

It is easy to decompose enzymes in the body, modify them chemically, and process them. It is easy to use them in the production of chemicals and proteins. This year, we have been trying to find out how to introduce DNA into cells, and how to develop DNA in vivo. [Production of fine particles] Production of fine particles with a diameter of 10 to 20μm Dissolve in distilled water and dissolve in aqueous solution. A mixture of DNA and a complex of DNA in aqueous solution. The optimal amount of DNA in the complex is determined by the optimal amount of DNA in the complex. COS-7 and NIH 3T3 cell lines were identified for gene expression in mammalian cell lines MKN74 and in aqueous solutions. The particle is in vitro, the time is clear, and the particle is confirmed. The degree of development of the virus is different from that of the market. The gene transfer was successful in inducing dendritic cells. [In vivo] The particles were injected into the abdominal cavity and accumulated in the breast tissue. The presence or absence of DNA complexes in the abdominal cavity and in the mammary gland The gene expression of GFP was found in the same part of the body. Now, peritoneal transfer therapy is planned, and the development of NK4, IL-12 and other therapeutic agents is discussed.