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耳鳴りの発症に関わる聴覚系ニューロン脱抑制機構の解明

阐明参与耳鸣发作的听觉系统神经元的去抑制机制

基本信息

批准号：
16659464
负责人：
渡部和男
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659464/
关键词：
耳鳴りトランスポータークロライド KCC2

项目摘要

平成16年度1.内耳損傷による聴覚系ニューロンでのKCC2 mRNAの発現変化(担当渡辺)耳後部切開後、中耳腔よりラットの内耳を開窓し100%エタノールを内耳に注入することで内耳損傷動物を作製する。内耳損傷後、3日、7日、14日後に断頭し凍結切片を作製し、35Sでラベルしたオリゴプローブを用いin situ hybridization法にてKCC2 mRNAの発現変化を観察した。内耳損傷により聴覚系中継核でのKCC2発現が低下傾向を示していることが捕らえられた。2.内耳損傷による聴覚系神経核におけるKCC2蛋白の量的変化(担当大野)in situ hybridizationの結果をもとに、内耳損傷後KCC2 mRNAの発現が最も変化していると思われる時期に断頭したラット脳から左右の蝸牛神経核、上オリーブ核を切り出し、その中から膜蛋白分画を抽出し、同様な操作で抽出したノーマルラットの膜分画の蛋白をコントロールとし、電気泳動することによってアクリルアミドゲル上に各々の抽出蛋白を展開、ニトロセルロース膜に転写後、抗KCC2抗体(Chemicon)を用いてKCC2蛋白の発現量の変化を比較することを試みた。KCC2のバンドは認められたが、両者の差を示すには十分なデータがまだ得られていない。このため平成17年度も引き続きこの検討を続けていく予定である。3.脳幹切片上でのKCC2蛋白の発現変化の検討(担当渡辺)内耳損傷ラットを4%パラホルムにて還流固定し、脳幹の前頭断切片を作製する。抗KCC2抗体(Chemicon)を用いた免疫組織化学法にてKCC2蛋白の発現量の変化、細胞内での局在の変化を切片上で観察することを試みている。この研究は平成17年度も引き続き行う予定である。

Heisei 16 1. KCC2 mRNA expression in the inner ear injury system (acting as a transition point) after posterior ear incision, middle ear cavity opening and inner ear injection into the inner ear. The expression of KCC2 mRNA was detected by in situ hybridization method at 3, 7 and 14 days after inner ear injury. Inner ear damage is associated with a tendency to decrease KCC2 in the nucleus of the brain. 2. Changes in the amount of KCC2 protein in the nucleus after inner ear injury (as a result of situ hybridization), the expression of KCC2 mRNA after inner ear injury is most changed during the period of brain injury, brain injury, and membrane protein extraction. The protein expression of KCC2 protein was compared with the protein expression of KCC2 protein after the development of protein expression, the protein expression of KCC2 protein after the development of protein expression, and the use of anti-KCC2 antibody (Chemicon). KCC2 has a very high probability of failure. In 2017, the Ministry of Education issued a report on the implementation of the plan. 3. Study on the development of KCC2 protein in stem sections (acting as a transition point). Inner ear damage: 4% reduction in flow fixation, and preparation of stem sections. Anti-KCC2 antibody (Chemicon) was used to detect the expression of KCC2 protein by immunohistochemistry, and the intracellular changes were observed on sections. The study was carried out in the 17th year of Heisei.