NF-κB DNA decoyを用いた炎症関連遺伝子発現の調節による歯周病態制御

使用 NF-κB DNA 诱饵调节炎症相关基因表达来控制牙周病理

• 批准号: 16659581
• 负责人: 和泉 雄一
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659581/
• 关键词: 歯周病; NF-κB; DNA decoy; 抗炎症効果; レポーターアッセイ; LPS; NF-κB DNA decoy; ホタルルシフェラーゼ; 病態制御

RAW264.7細胞でのレポーターアッセイ系(pNF-κB-Luciferaseのトランスフェクション)を利用して、TATペプチドを用いたNF-κB TAT-PNA/DNA decoyの評価を行った。細胞膜透過性TATペプチドにヌクレアーゼ耐性であるPNAを連結させたものを合成し、それにNF-κB結合配列を含むDNAオリゴをアニーリングさせたNF-κB TAT-PNA/DNA decoyを作製した。これをpNF-κB-Luciferaseの遺伝子導入を行ったRAW264.7細胞に作用させ、LPS存在下におけるdecoyの抗炎症効果を調べた。その結果、NF-κB TAT-PNA/DNA decoyを処理しても、LPSに依存したLuciferase活性の抑制作用は認められなかった。PNA/DNA decoyの安定性の問題が推測されたので、使用するDNAオリゴをphosphothioate修飾されたs-DNAを用いたが、十分な効果は確認できなかった。TATペプチドに依存してdecoyが遺伝子導入試薬を用いることなく培地中に添加するだけで細胞内NF-κBの活性化を抑制できるという予測に反した結果となった。RAW264.7細胞でのレポーターアッセイ系が歯周組織由来細胞での炎症反応を解析する目的で有効なスクリーニング系であるかについて検討した。ヒト咽頭上皮ガン細胞由来であるκB細胞に対して遺伝子導入を行ったところLPSによる反応性は、低値であったが、炎症性サイトカインであるIL-1の添加によってLuciferase活性が顕著に上昇することが確認された。よってNF-κBの活性化を指標にしたレポーターアッセイ系が、歯周組織由来細胞に対しても有効な系であることが明らかとなり、本アッセイ系を用いることで歯周病態を制御する核酸や医薬を簡便にスクリーニングすることが可能になると考えられる。

在RAW264.7细胞中使用了报告基督测定系统（PNF-κB-荧光素酶的转染），用于使用TAT肽评估NF-κBTAT-PNA/DNA诱饵。合成一个细胞膜可渗透的TAT肽，并将抗核酸酶的PNA与其连接，并与含有NF-κB结合序列的DNA寡核酸酶一起退火，以产生NF-κBTAT-PNA/DNA诱饵。这是在使用PNF-κB-荧光酶转移基因转移的RAW264.7细胞上进行的，并研究了诱饵在LPS存在下的抗炎作用。结果，用NF-κBTAT-PNA/DNA诱饵治疗没有显示LPS依赖性荧光素酶活性的抑制作用。由于推测了PNA/DNA诱饵的稳定性问题，因此所使用的DNA寡磷脂是磷酸硫酸盐修饰的S-DNA，但无法确认足够的效果。该结果与预测相反：诱饵可以通过简单地将其添加到培养基中而无需使用基因转移试剂而抑制细胞内NF-κB激活。我们研究了RAW264.7细胞中的报告基因测定系统是否是分析牙周组织衍生细胞中炎症反应的有效筛选系统。基因转移是对源自人咽上皮癌细胞的κB细胞进行的，尽管LPS反应性较低，但可以证实，添加炎性细胞因子IL-1会显着增加荧光素酶活性。因此，已经揭示了使用NF-κB作为指数激活的报告基因测定系统也有效地针对牙周组织衍生的细胞，并且相信使用该测定系统将允许轻松筛查核酸和控制牙周病理学的药物。

项目成果

Statin reduce inflammation in periodontal diseases.

他汀类药物可减少牙周疾病的炎症。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Journal of Clinical and Experimental Medicine 212・9
• 作者: 清水邦彦;小川京;大口純人;坂巻達夫;前田隆秀;Kenji Sakoda;Matsuo Yamamoto
• 通讯作者: Matsuo Yamamoto