NF-κB DNA decoyを用いた炎症関連遺伝子発現の調節による歯周病態制御

使用 NF-κB DNA 诱饵调节炎症相关基因表达来控制牙周病理

• 批准号: 16659581
• 负责人: 和泉 雄一
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659581/
• 关键词: 歯周病; NF-κB; DNA decoy; 抗炎症効果; レポーターアッセイ; LPS; NF-κB DNA decoy; ホタルルシフェラーゼ; 病態制御

RAW264.7細胞でのレポーターアッセイ系(pNF-κB-Luciferaseのトランスフェクション)を利用して、TATペプチドを用いたNF-κB TAT-PNA/DNA decoyの評価を行った。細胞膜透過性TATペプチドにヌクレアーゼ耐性であるPNAを連結させたものを合成し、それにNF-κB結合配列を含むDNAオリゴをアニーリングさせたNF-κB TAT-PNA/DNA decoyを作製した。これをpNF-κB-Luciferaseの遺伝子導入を行ったRAW264.7細胞に作用させ、LPS存在下におけるdecoyの抗炎症効果を調べた。その結果、NF-κB TAT-PNA/DNA decoyを処理しても、LPSに依存したLuciferase活性の抑制作用は認められなかった。PNA/DNA decoyの安定性の問題が推測されたので、使用するDNAオリゴをphosphothioate修飾されたs-DNAを用いたが、十分な効果は確認できなかった。TATペプチドに依存してdecoyが遺伝子導入試薬を用いることなく培地中に添加するだけで細胞内NF-κBの活性化を抑制できるという予測に反した結果となった。RAW264.7細胞でのレポーターアッセイ系が歯周組織由来細胞での炎症反応を解析する目的で有効なスクリーニング系であるかについて検討した。ヒト咽頭上皮ガン細胞由来であるκB細胞に対して遺伝子導入を行ったところLPSによる反応性は、低値であったが、炎症性サイトカインであるIL-1の添加によってLuciferase活性が顕著に上昇することが確認された。よってNF-κBの活性化を指標にしたレポーターアッセイ系が、歯周組織由来細胞に対しても有効な系であることが明らかとなり、本アッセイ系を用いることで歯周病態を制御する核酸や医薬を簡便にスクリーニングすることが可能になると考えられる。

RAW264.7 cells で の レ ポ ー タ ー ア ッ セ イ system (pNF - kappa B predominate - Luciferase の ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン) を using し て, TAT ペ プ チ ド を with い た nf-kappa B TAT - PNA/DNA named decoy の review 価 を line っ た. Cell membrane permeability TAT ペ プ チ ド に ヌ ク レ ア ー ゼ patience で あ る PNA を link さ せ た も の を synthetic し, そ れ に nf-kappa B combined with column を containing む DNA オ リ ゴ を ア ニ ー リ ン グ さ せ た nf-kappa B TAT - PNA/DNA named decoy を cropping し た. こ れ を pNF kappa B predominate - Luciferase の posthumous son 伝 import line を っ た RAW264.7 cells に さ せ, the presence of LPS に お け る named decoy の anti-inflammatory unseen fruit を adjustable べ た. そ の results, the nf-kappa B TAT - PNA/DNA named decoy を 処 Richard し て も, LPS に dependent し た の Luciferase activity inhibition は recognize め ら れ な か っ た. PNA/DNA named decoy の stability の questions が さ れ た の で, use す る DNA オ リ ゴ を phosphothioate modified さ れ た s - DNA を with い た が, very な unseen fruit は confirm で き な か っ た. TAT ペ プ チ ド に dependent し て named decoy が heritage 伝 son try importing 薬 を with い る こ と な く に added in the petty す る だ け nf-kappa B の で cell activation を inhibit で き る と い に う to test the し た results と な っ た. RAW264.7 cells で の レ ポ ー タ ー ア ッ セ イ department が 歯 weeks tissue origin cells で の anti inflammation 応 を parsing す る purpose で have sharper な ス ク リ ー ニ ン グ department で あ る か に つ い て beg し 検 た. ヒ ト those epithelial ガ ン cell origin で あ る kappa B cells predominate に し seaborne て posthumous son 伝 import line を っ た と こ ろ LPS に よ る は 応 sex, low numerical で あ っ た が, inflammatory サ イ ト カ イ ン で あ る IL - 1 の add に よ っ て Luciferase activity が 顕 through に す る こ と が confirm さ れ た. よ っ て nf-kappa B の activeness を index に し た レ ポ ー タ ー ア ッ セ イ が, tissue origin cells に 歯 weeks し seaborne て も have sharper な department で あ る こ と が Ming ら か と な り, this ア ッ セ を イ department with い る こ と で 歯 week pathological を suppression す る nucleic acid や medical 薬 を simple に ス ク リ ー ニ ン グ す る こ と が may に な る と exam え ら れ る.

项目成果

Statin reduce inflammation in periodontal diseases.

他汀类药物可减少牙周疾病的炎症。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Journal of Clinical and Experimental Medicine 212・9
• 作者: 清水邦彦;小川京;大口純人;坂巻達夫;前田隆秀;Kenji Sakoda;Matsuo Yamamoto
• 通讯作者: Matsuo Yamamoto

Simvastatin decreases IL-6 and IL-8 production in epithelial cells

• DOI: 10.1177/154405910608500608
• 发表时间: 2006-06-01
• 期刊: JOURNAL OF DENTAL RESEARCH
• 影响因子: 7.6
• 作者: Sakoda, K.;Yamamoto, M.;Izumi, Y.
• 通讯作者: Izumi, Y.