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カタユウレイボヤ培養細胞株の樹立と遺伝子機能解析

Ciona培养细胞系的建立及基因功能分析

基本信息

批准号：
17657076
负责人：
佐々木尚子
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Konan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

ホヤ培養細胞の確立を目指し、これまで種々の試行実験を行ってきた。その中で最も可能性が高いと考えられた囲心腔を出発材料として、繰り返し実験を行った。その過程で増殖能の見られる細胞集団が複数個得られた。ある細胞集団からゲノムDNAを抽出し、カタユウレイボヤに特異的な配列をPCRで増幅してみた結果、一応カタユウレイボヤ由来の細胞であることが確認できた。これらの細胞は浮遊細胞であったので、メチルセルロースを用いてクローニングを行い、最終的に2種類の細胞クローンの確立に成功した。1. 18s rDNAの配列解析クローニングできた2種類の細胞の遺伝子配列を18S rDNAのSR1とSR7のプライマーを使って調べてみた。その結果、海産のラン藻類のラビリンチュラと配列が非常に似ていることがわかった。さらにこの配列をホモロジー検索にかけてみたところ、ラビリンチュラやトリコモナスといったような海産性ラン藻類と類似性が高く、ホヤではないという結論に至った。2.細胞の保存条件の検討細胞を凍結保存するために、凍結剤の検討を行った。10%DMSO添加培地やセルバンカー(日本全薬工業株式会社)、TCプロテクター(大日本住友製薬株式会社)など数種類の市販されている凍結剤で凍結を試みてみたが、どの凍結剤においても、細胞を生かした状態で解凍することはできなかった。今後は、グリセロールを用いた凍結法についても検討していく予定である。3.培地への工夫細胞の増殖をさらによくするために、卵巣や表皮・筋膜体などの器官をすりつぶし、培養培地に加え培養してみたが、これまでのところ培地のみで培養した場合との違いはほとんど見られていない。今後は添加液の濃度や添加量などについても検討していく。

The establishment of cultured cells is an important step in the development of cell culture. The highest probability is that the material will be released and the material will be returned. The process of reproduction can be seen in a cell set consisting of a plurality of cells. The DNA of the cell set was extracted, the DNA sequence was identified, and the PCR results were amplified. The cells were cultured in the medium, and finally two kinds of cells were successfully established. 1. 18S rDNA sequence analysis: 2 kinds of cell sequence analysis: 18S rDNA sequence analysis: SR1 sequence analysis: SR7 sequence analysis: The results of the sea, the algae and the algae are very similar. In addition, the similarity of algae and marine species is high, and the similarity of algae and marine species is high. 2. Cell Preservation Conditions and Freezing Conditions 10% DMSO was added to the culture medium (Nippon Chuen Kyo Co., Ltd.), TC medium (Dainippon Sumitomo Co., Ltd.), and several types of market vendors were added to the frozen medium. In the future, we will use the freezing method to determine the future. 3. The culture of human cells in vitro is a process of development. In the future, the concentration and amount of the additive will be determined.