安定同位体-メタゲノムテクノロジーの融合による新規有用遺伝子の探索と利用

通过稳定同位素和宏基因组技术的融合寻找和利用新的有用基因

• 批准号: 17658038
• 负责人: 中島 敏明
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17658038/
• 关键词: メタゲノムスクリーニング; メタン酸化細菌; メタンモノオキシゲナーゼ

メタンモノオキシゲナーゼは、メタン→メタノールを常温常圧下で触媒することから、産業上きわめて価値が高い。しかし既知のタンモノオキシゲナーゼ遺伝子は大腸菌での発現が極めて弱く、実用化には至っていない。そこで申請者は発想を逆転させて、既得の遺伝子の発現を試みるのでは無く、「大腸菌で発現可能な遺伝子」を直接自然界から探し出すことを考えた。昨年度、メタン資化生菌のDNAのみを^<13>Cに置き換えることを目的に、各種土壌サンプルを^<13>Cでラベルしたメタン存在下に暴露後、全DNAを抽出し、超遠心により^<13>C-DNAを選択的に回収して、メタン資化性菌のみからなるメタゲノムライブラリーを構築した。本ライブラリから16SrDNAを増幅、クローン解析を行った結果、未知の新規メタン資化性菌が多数含まれていることを確認した。次にここからスクリーニングに十分な長さの遺伝子断片を回収し、大腸菌に導入するための基本技術を確立した。今年度はこのライブラリーからhybridization法によりメタンモノオキシゲナーゼオペロンの取得を行った。その結果、5,000クローンのライプラリーから1種類の新規なparticulate MMOの取得に成功した。

メ タ ン モ ノ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ は, メ タ ン - メ タ ノ ー ル を で す the catalyst under normal temperature often 圧 る こ と か ら, industry き わ め て 価 numerical が い high. し か し already know の タ ン モ ノ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ posthumous son 伝 は coliform で の 発 が now extremely め て weak く, be use に は to っ て い な い. そ こ で applicants は 発 think を inverse planning さ せ て, vested の posthumous son 伝 の 発 を now try み る の で は く, "coliform で 発 may now な heritage 伝" を direct nature か ら agent し out す こ と を exam え た. Last year, メ タ ン endowment im bacteria の DNA の み を ^ < 13 > C に buy き in え る こ と に を purpose, all kinds of soil 壌 サ ン プ ル を ^ < 13 > C で ラ ベ ル し た メ タ ン に after exposure, in the presence of total DNA を drew し, vast heart に よ り ^ < 13 > C - DNA を sentaku に back 収 し て, メ タ ン endowment nature bacteria の み か ら な る メ タ ゲ Youdaoplaceholder0 ブラリ ブラリ を を を construct た. This ラ イ ブ ラ リ か ら 16 srdna を rights, ク ロ ー ン parsing line を っ た results, unknown の new rules メ タ ン endowment nature bacteria が contains most ま れ て い る こ と を confirm し た. Time に こ こ か ら ス ク リ ー ニ ン グ に very long な さ の posthumous son 伝 fragment を back 収 し, coliform に import す る た め の basic technical を establish し た. Our は "こ の ラ イ ブ ラ リ ー か ら hybridization method に よ り メ タ ン モ ノ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ オ ペ ロ ン の を row っ た. そ の results, 5000 ク ロ ー ン の ラ イ プ ラ リ ー か ら 1 species の new rules な particulate に successful MMO の し た.