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ピロリ菌発現ベクターを利用した病原性毒素の生細胞モニタリング解析

使用幽门螺杆菌表达载体对致病毒素进行活细胞监测分析

基本信息

批准号：
17659100
负责人：
佐野健司
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659100/
关键词：
H.pylori Cag A Vac A Shuttle vector shuttle vector

项目摘要

H.pyloriの標準株ATCC43504からDNAを抽出し、Cag A, Vac Aの全長の遺伝子をPCRで増幅してクローニングし、シークエンスで確認した。よく知られているように、H.pyloriに株ごとにCag A, Vac Aの塩基変異が多く存在し、これが病原性と深い関係がある。特に、Cag Aのチロシンリン酸化部位のリピートの数は重要で、標準株ATCC43504の場合は5回と最も多い方に属しており、病原性の強い性質を備えているものと推測される。Cag Aのチロシンを含む繰り返し配列部位は上皮細胞に注入された後に、細胞内のリン酸化蛋白でチロシン残基がリン酸化され、これによって細胞内にシグナル伝達が開始され、サイトカインなどの起炎分子の誘導が起こるとされている。Cag A遺伝子をFLAGを含む発現ベクターとGFPを含む発現ベクターに組み込んで、まずHEK293T, AGSなどの培養細胞内での発現を観察した。次に、TagつきのCag A遺伝子をshuttle vectorであるH.pylori発現ベクター(pHel3)に組み込んで大腸菌でまず発現させ、抗生物質で選択した後に、H.pyloriに遺伝子導入した。Tagがあるかないかで、内因性Cag Aと強制発現したCag Aを区別した。そして、Cag Aを導入したH.pyloriは抗生剤によって選択した。このTagつきCag A導入H.pyloriをAGSに感染させたところ、遺伝子操作のないH.pyloriと同様なハミングバードと言われる変化を示した。

The standard strain of H.pylori, ATCC43504, DNA, Cag A, Vac A, Vac A, Cag A, Vac A, Cag A, Vac A. It is known that the pathogenicity of Cag A, Vac A, Vac An and its pathogenicity are deep. In particular, Cag A was used to treat the acidified site, the number of acidified parts was important, the standard strain ATCC43504 was used in combination with 5 standard strains, and the pathogenicity was strong. In Cag A, after the epithelial cells were injected into the collocation, the intracellular protein was acidified, the residues were acidified, the intracellular antigens were activated, and the inflammatory molecules were activated. Cag A gene FLAG contains information about how to detect HEK293T, HEK293T, and AGS. Intracellular DNA is detected. After Tag, Tag, Cag A, shuttle vector, H.pylori, pHel3, anti-biotic, anti-biotic, anti-bacterial, anti-biotic, anti-biotic, anti Tag is critical, and Cag An is an internal cause that forces the identification of Cag A. Enter Cag An into the H.pylori antibiotic filter to select the correct candidate. "Tag", "Cag A", "H.pylori", "AGS", "infection", "sub-operations", "H.pylori" and "sub-operations".