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H.pylori由来酸性ホスファターゼの宿主応答制御機序の解析

幽门螺杆菌酸性磷酸酶宿主反应控制机制分析

基本信息

批准号：
17659126
负责人：
八尋錦之助
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659126/
关键词：
細菌シグナル伝達好中球走化性活性酸素

项目摘要

本研究において使用したヘリコバクター・ピロリ菌の外膜蛋白質由来の酸性ホスファターゼ(HppA)は、大腸菌によりHppA wild type及びmutantsを発現ベクターのC末端側にHis、cMycタグ付加させ発現させた。この蛋白質を精製はNiカラムとAnti-cMyc抗体カラムにより精製した。活性酸素産生に及ぼす効果はルミノメーターを使用し、種々の刺激による好中球からの活性酸素の産生能を評価する。また、活性酸素産生および走化性に関与するシグナル伝達系へのHppAの影響を調べた。更に、走化性、貪食能に対する影響も調べた。ヒト好中球における活性酸素産生に及ぼすHppAの影響を調べたところ、PMA, fMLP,ザイモザン刺激による活性酸素産生に対して、他の菌種の酸性ホスファターゼでみられる抑制効果は認められなかった。また、胃癌細胞由来の培養細胞に対して添加したが、形態学的な変化は認められなかった。更に、サブストラクション法によりHppAにより発現誘導あるいは抑制される遺伝子の検索を行ったが、顕著な遺伝子は確認出来なかった。次に、好中球の走化性に対するHppAの効果を調べた。好中球にHppA wtを作用させたところ、走化性に重要な働きをする細胞表面受容体CXCR1のmRNAの発現量が低下していることを見いだした。ホスファターゼ活性を持たない変異体を作用させた場合にはこの抑制効果は認められないことから、HppAのホスファターゼ活性がこの抑制効果に重要な働きをしていると推察された。次いで、HppAを作用させたヒト好中球の細胞表面のCXCR1が蛋白レベルで減少しているのか、FACScanを用い解析を行った。結果、コントロールの細胞のみを一定時間処理しただけで、CXCR1の発現量の減少が見られ、HppA wtで処理した細胞におけるCXCR1の減少と有意差を認めなかった。

In this study, we used the HppA (HppA) gene to detect HppA wild type and mutants in E. coli. The protein is purified and the Anti-Myc antibody is purified. Active acid production and effect evaluation of active acid production in the context of seed stimulation The influence of HppA on the production and chemical properties of active acids is modulated by the influence of HppA on the production and chemical properties of active acids. More, more, more. The production of active acid in the medium and the influence of HppA are regulated by PMA, fMLP, and the production of active acid in the medium and the influence of HppA on the acidity of other strains are inhibited. The origin and culture of gastric cancer cells were identified by morphological changes. In addition, the method of "HppA" can be used to detect and suppress the occurrence of the virus, and the virus can be confirmed. Second, the good ball and the mobility of the HppA effect adjustment The expression of CXCR1 mRNA on the cell surface was reduced due to the role of HppA wt in cell proliferation. The effect of the enzyme on the immune system is very important. In addition, HppA plays an important role in the analysis of CXCR1 protein on the surface of cells in the world. The results showed that CXCR1 expression decreased significantly after treatment with HppA wt, and CXCR1 expression decreased significantly after treatment with HppA wt.