難治性消化器癌患者血清中の自己抗体検出用プロテインチップの開発

难治性胃肠癌患者血清自身抗体检测蛋白芯片的研制

• 批准号: 17659166
• 负责人: 蔵満 保宏
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659166/
• 关键词: プロテオミクス; 肝細胞癌; 自己抗体; HSP70; Mn-SOD; Peroxiredoxin; プロテインチップ; 質量分析

難治性消化器癌患者血清中の自己抗体検出用プロテインチップの開発を目指して以下の実験を行った。ただし、今回は難治性消化器癌のうち、肝癌にターゲットを絞って自己抗体検出用プロテインチップを開発した。下記に目的、方法、結果を記載する。これまでC型肝炎ウイルス(HCV)感染後に発癌(HCC)した患者(HCV-HCC)の癌部組織と非癌部組織のプロテオーム解析を行い報告してきた。しかしながら、腫瘍マーカーを目的とした患者血清中の特異的タンパク質の同定はできていない。そこで、腫瘍マーカーとして期待できる患者血清中の自己抗体検出を目的として、B型肝炎ウイルス(HBV)もしくはHCV感染後に発癌した15例の患者からの癌切除手術の際に入手した癌部と非癌部の組織から抽出したタンパク質を二次元電気泳動で展開した後にPVDF膜に転写して、それぞれのHCC患者自身の血清、もしくは20例の健常者血清を用いてウェスタンブロットを行った結果、健常者血清に比べてHCC患者血清に強く認識されるタンパク質スポットが4スポット検出された。これら4スポットに対応するCBBR-250によって染色したゲル上のスポットをLC-MS/MSを用いた質量分析により同定した結果、Peroxiredoxin、HSP70.1、Mn-SODの3つが同定できた。質量分析結果の確認のためにリコンビナントタンパク質のPeroxiredoxin、HSP70.1、Mn-SODを用いて血清のウエスタンブロットを行ったところ、健常者血清に比べ有意にHCC患者血清中のPeroxiredoxin、HSP70.1、Mn-SODに対する自己抗体の増強が確認できた。さらに、HCC患者血清中のHSP70.1に対する自己抗体の抗体価を検証するために、血清を希釈してHSP70.1リコンビナントタンパク質に対してウエスタンブロットを行ったところ、1000倍希釈まで検出可能であることが明らかになった。これら3種類の自己抗体に認識される抗原タンパク質をダイヤモンド様コーティング金属基板に強固に貼付けたプロテインチップを開発した。

The development of anti-self antibodies in the serum of patients with refractory digestive tract cancer is indicated below. Tada, this time, we have developed a new antibody detection tool for refractory digestive cancer and liver cancer. The purpose, method and results are described below. The analysis of cancerous and non-cancerous tissues in patients with hepatitis C virus (HCV) infection was carried out. There are specific changes in the serum of the patients. In 15 cases of HCC, the serum of HCC patients was isolated from the tissues of the non-cancerous part at the time of tumor resection. The serum of 20 healthy people was used to detect the presence of HCC. The serum of healthy people was stronger than that of HCC patients. CBBR-250 is the most suitable dye for the determination of Peroxiredoxin, HSP70.1 and Mn-SOD in LC-MS/MS. The results of mass analysis confirmed that there was an increase in the antibodies to Peroxiredoxin, HSP70.1 and Mn-SOD in serum from healthy individuals compared with those from HCC patients. In addition, HSP70.1 in the serum of HCC patients to their own antibodies to the antibody detection, serum HSP70.1 in the serum to determine the quality of the sample, 1000 times the likelihood of detection. These three types of antibodies recognize the presence of antigens, substances, and materials on metal substrates.

项目成果

Proteomic analysis of macrophages stimulated by LPS. -LPS inhibits the cleavage of nucreophosmin-

LPS 刺激的巨噬细胞的蛋白质组学分析。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Electrophoresis (in press)
• 作者: Zhang;X.
• 通讯作者: X.

Expression of glycolytic enzymes is increased in pancreatic cancerous tissues as evidenced by proteomic profiling by two-dimensional electrophoresis and liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry.

• DOI: 10.3892/ijo.30.4.849
• 发表时间: 2007-04
• 期刊: International journal of oncology
• 影响因子: 5.2
• 作者: Kuniko Mikuriya;Y. Kuramitsu;S. Ryozawa;M. Fujimoto;Sayaka Mori;M. Oka;K. Hamano;K. Okita;I. Sakaida;K. Nakamura

Analysis on heat stress-induced hyperphosphorylation of stathmin at serine 37 in Jurkat cells by means of two-dimensional gel electrophoresis and tandem mass

二维凝胶电泳和串联质谱分析热应激诱导 Jurkat 细胞中 stathmin 丝氨酸 37 的过度磷酸化

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Chromatograph A 1106
• 作者: Nakamura;K.
• 通讯作者: K.

Proteornic analysis of cancer tissues : shedding light on carcinogenesis and possible biomarkers.

癌症组织的蛋白质组学分析：揭示致癌作用和可能的生物标志物。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Proteomics 6・20
• 作者: Kuramitsu;Y.
• 通讯作者: Y.

A novel approach of protein immobilization for protein chips using an oligo-cysteine tag

• DOI: 10.1021/pr0504889
• 发表时间: 2006-09-01
• 期刊: JOURNAL OF PROTEOME RESEARCH
• 影响因子: 4.4
• 作者: Ichihara, Teruhisa;Akada, Junko K.;Nakamura, Kazuyuki
• 通讯作者: Nakamura, Kazuyuki