分子病態検査学的手法による漢方医学診断(証)の解明

利用分子病理学检测方法阐明中医诊断（证）

• 批准号: 17659201
• 负责人: 仁井見 英樹
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659201/
• 关键词: 漢方医学; 証; 分子病態; 転写因子; 関節リウマチ; cDNAマイクロアレイ; 桂枝加朮附湯; HLA-DRB1; NF-κB; 一酸化窒素

本研究の目的は、西洋医学で重視される「根拠に基づいた医療(EBM)」や「遺伝子情報に基づいた医療(テーラーメイド医療)」の考えを漢方医学の「証」の診断に照合することで、「証」の分子病態を解析することである。目的達成の為、平成18年度は以下の研究を実施した。cDNAマイクロアレイを用いた関節リウマチにおける「証」検証研究富山大学和漢診療科を受診する患者群から、RA患者を診察し、ACR score set,年齢、性、合併症病名、血圧、白血球数、血小板数、CRP, RF,赤沈、MMP-3,の検査を投薬前後で実施した。尚、承認された倫理委員会要項に則り採血と遺伝子解析に関するインフォームドコンセントを得た。上記選考基準を満たし、「桂枝加朮附湯」服用(一ヶ月)にて、症状が緩和した患者(3例)と緩和しなかった患者(3例)の桂枝加朮附湯服用前と後の末梢血リンパ球を検体とした。3例ずつのリンパ球検体からmRNAを抽出し、それぞれの検体を治療前・後、responder/non-responderに分けてduplicateでマイクロアレイ解析を行った。尚、t-test p-value<0.05のcut off値で統計解析を施行した。以上、cDNAマイクロアレイによる遺伝子発現プロファイルの解析により、以下の研究成果を得た。(1)漢方薬有効例で服用前後に特異的に変動した(無効例では変動しない)54の遺伝子を明らかにした。(2)漢方薬有効例で特異的に変動し、関節リウマチ(RA)特異的な16の遺伝子を明らかにした。(3)得られた16の遺伝子プロファイルは、HLA遺伝子群や、γ-globulin関連遺伝子が多く含まれており、RAの病態メカニズムの解明と、漢方薬(桂枝加朮附湯)の薬効メカニズムの解明に寄与することが期待される。(4)無効例に比較して有効例で投薬前に発現差があり、桂枝加朮附湯で発現が変動するRA関連遺伝子として、11の遺伝子を明らかにした。これらの遺伝子発現を漢方薬投薬前に調べることにより、漢方薬が有効な患者と無効な患者を投薬前に判断できる可能性がある。今後、漢方薬薬効を診断する遺伝子診断システムの確立が期待される。(5)これらの抽出した遺伝子発現プロファイルの中で、特にHLA-DRB1を中心に、漢方薬の分子レベルでの薬効メカニズムを考察した。HLA-DRB1はRAの病態に関与するHLAII型遺伝子として知られており、自己抗体の産生に関与すると近年報告されている。漢方薬(桂枝加IL附湯)が有効な患者群では、無効な患者群に比較して2倍程HLA-DRB1の発現が上昇しており、漢方薬投薬によってその発現を50%まで減らすことが出来る。この作用が、HLA-DRB1による抗原提示作用の減少につながり、RAの病態改善(炎症の改善)に導くものと考えられる。

The purpose of this study is to examine the importance of EBM and EBM in Western medicine, and to analyze the molecular pathology of syndrome in Chinese medicine. To achieve the goal, Heisei 18 years of research and implementation of the following The study of "syndrome" was carried out before and after the administration of cDNA, RA, ACR score set, age, sex, comorbid disease name, blood pressure, white blood cell count, platelet count, CRP, RF, erythrocyte, MMP-3. It is acknowledged that the Ethics Committee has important information on blood collection and genetic analysis. The above criteria were used for examination. After taking Guizhi Jiashu Decoction for one month, the symptoms were relieved in patients (3 cases) and relieved in patients (3 cases). 3 cases showed that the expression of mRNA was extracted, the expression of mRNA was analyzed before and after treatment, and the response/non-response was analyzed. Cut off value of t-test p-value<0.05 is analyzed statistically. The above, cDNA development, and analysis results were obtained. (1)The Chinese prescription has a special movement before and after taking it (no case)54 times (2)The Han Dynasty has a special case of movement, joint release (RA), special release (RA), and special release (RA). (3)The results show that there are 16 genes in the genome, HLA genes, γ-globulin related genes, RA pathological genes, Chinese medicine (cassia twig plus soup) and Chinese medicine. (4)There are no examples of RA related genes in comparison with those in the past, and there are examples of RA related genes in comparison with those in the past. The probability of the occurrence of this disease before the patient's injection is high. In the future, Chinese medicine diagnosis system is expected to be established (5)This article reviews the molecular evolution of HLA-DRB1 and HLA-DRB1 in Chinese. HLA-DRB1 is associated with RA pathogenesis and HLA-II gene expression. The occurrence of 2-fold HLA-DRB1 increased in patients with and without Chinese herbal medicine, and decreased by 50%. This effect, HLA-DRB1 antigen prompt effect reduction, RA pathology improvement (inflammation improvement) lead to the study of the effect of HLA-DRB 1 antigen prompt effect reduction.

项目成果

Keishibukuryogan (gui-zhi-fu-ling-wan), a Kampo formula, decreases disease activity and soluble vascular adhesion molecule-1 in patients with rheumatoid arthritis.

Kampo公式Keishibukuryogan（Gui-Zhi-Fu-ling-wan）在类风湿关节炎患者中降低了疾病活性和可溶性血管粘附分子-1。

• DOI: 10.1093/ecam/nel025
• 发表时间: 2006-09
• 期刊: EVIDENCE-BASED COMPLEMENTARY AND ALTERNATIVE MEDICINE
• 作者: Nozaki, Kazuya;Hikiami, Hiroaki;Goto, Hirozo;Nakagawa, Takako;Shibahara, Naotoshi;Shimada, Yutaka
• 通讯作者: Shimada, Yutaka

Anti-inflammatory effect of pitavastatin on NF-kappaB activity by TNF-alpha in hepatocellular carcinoma cells.

匹伐他汀对肝癌细胞中 TNF-α 的 NF-κB 活性的抗炎作用。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Biol Pharm Bull. 29 (4)
• 作者: Wang J;Tokoro T;Higa S;Kitajima I
• 通讯作者: Kitajima I

A randomized double blind placebo-controlled clinical trail of Hochuekkito, atraditional herbal medicine, in the treatment of elderly with weakness N of one and responder restricted design.

Hochuekkito（一种传统草药）治疗患有 N 级无力的老年人和反应者限制设计的一项随机双盲安慰剂对照临床试验。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Phytomedicine 12(8)
• 作者: Satoh N;Sakai S;kogure T;Tahara E;Origasa H;Shimada Y;Kohoda K;Okubo T;Terasawa K
• 通讯作者: Terasawa K

Pitavastin at low dose activates endothelial nitric oxide synthetase through PI3K-Akt pathway in endothelial cells

低剂量 Pitavastin 通过 PI3K-Akt 通路激活内皮细胞中的内皮一氧化氮合成酶

• 发表时间: 2005
• 期刊: Life Sciences 79(19)
• 作者: Wang J;Tokoro T;Matsui K;Higa S;Kitajima I
• 通讯作者: Kitajima I

TGF-b and Smad signaling pathway support transcnptonic reprogramming during epithelial-mesenchymal cell transcription.

TGF-b 和 Smad 信号通路支持上皮间质细胞转录过程中的转录重编程。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Mol Biol Cell 16(4)
• 作者: Valcourt U;Kowanetz M;Niimi H;Heldin CH;Moustakas A
• 通讯作者: Moustakas A